1. Stafylokoky, ich vlastnosti. Klasifikácia, faktory patogenity stafylokokov. Choroby spôsobené stafylokokmi. Epidemiológia a charakteristika nemocničných kmeňov stafylokokov. Laboratórna diagnostika, špecifická prevencia a terapia .

Najznámejší:

    Staphylococcus aureus je pre človeka najpatogénnejší. Pomenovaný pre svoju schopnosť tvoriť zlatý pigment. U človeka môže spôsobiť hnisavé zápalové procesy takmer vo všetkých orgánoch a tkanivách.

    Staphylococcus epidermidis – často sa vyskytuje na ľudskej koži a slizniciach, môže spôsobiť sepsu, endokarditídu, konjunktivitídu, hnisavú infekciu rán a hnisavé infekcie močových ciest.

    Saprofytický stafylokok (Staphylococcus saprophyticus) - môže spôsobiť akútnu cystitídu a uretritídu.

Taxonómia: patria do oddelenia Firmicutes, čeľade Micrococcacae, rodu Staphylococcus. Tento rod zahŕňa 3 druhy: S.aureus, S.epidermidis a S.saprophyticus.

Morfologické vlastnosti: Všetky typy stafylokokov sú okrúhle bunky. V nátere sú umiestnené v asymetrických zhlukoch. Bunková stena obsahuje veľké množstvo peptidoglykánu, teichoových kyselín s ním spojených a proteínu A. Sú grampozitívne. Netvoria spóry a nemajú bičíky. U niektorých kmeňov možno nájsť kapsulu. Môže vytvárať L-formy.

Kultúrne vlastnosti: Stafylokoky sú fakultatívne anaeróby. Rastie dobre na jednoduchých médiách. Na hustých médiách tvoria hladké, konvexné kolónie s rôznymi pigmentmi, ktoré nemajú taxonomický význam. Môže rásť na agare s vysokým obsahom NaCl. Majú sacharolytikum

kimi a proteolytické enzýmy. Stafylokoky môžu produkovať hemolyzíny, fibrinolyzín, fosfatázu, laktamázu, bakteriocíny, enterotoxíny a koagulázu.

Stafylokoky sú flexibilné a rýchlo sa stávajú odolnými voči antibakteriálnym liekom. Významnú úlohu v tom zohrávajú plazmidy, prenášané pomocou transdukcie fágov z jednej bunky do druhej. R-plazmidy určujú rezistenciu voči jednému alebo viacerým antibiotikám prostredníctvom produkcie β-laktamázy.

Antigénna štruktúra. Asi 30 antigénov, ktorými sú proteíny, polysacharidy a kyseliny teichoové. Zahrnuté bunková stena stafylokok obsahuje proteín A, ktorý sa môže pevne viazať na Fc fragment molekuly imunoglobulínu, zatiaľ čo fragment Fab zostáva voľný a môže sa viazať na špecifický antigén. Citlivosť na bakteriofágy (fagotyp) je spôsobená povrchovými receptormi. Mnohé kmene stafylokokov sú lyzogénne (tvorba niektorých toxínov nastáva za účasti profága).

Faktory patogenity: Podmienečne patogénne. Mikrokapsula chráni pred fagocytózou a podporuje mikrobiálnu adhéziu; zložky bunkovej steny – stimulujú rozvoj zápalových procesov. Agresívne enzýmy: kataláza – chráni baktérie pred pôsobením fagocytov, β-laktamáza – ničí molekuly antibiotík.

Odpor. Bežná je odolnosť v prostredí a citlivosť na dezinfekčné prostriedky.

Patogenéza. Zdrojom stafylokokovej infekcie je človek a niektoré druhy zvierat (pacienti alebo nosiči). Mechanizmy prenosu: dýchacie, kontakt s domácnosťou, výživa.

Imunita: P ostifektívne – bunkovo-humorálne, nestabilné, nenabité.

POLIKLINIKA. Asi 120 klinických foriem prejavov, ktoré sú lokálne, systémové alebo generalizované. Patria sem hnisavé zápalové ochorenia kože a mäkkých tkanív (vredy, abscesy), poškodenie očí, ucha, nosohltana, urogenitálneho traktu, tráviaceho systému (intoxikácia).

Mikrobiologická diagnostika . Materiál na výskum - hnis, krv, moč, spútum, výkaly.

Bakterioskopická metóda: Z testovaného materiálu (okrem krvi) sa pripravia nátery a zafarbia sa Gram. Prítomnosť gramových „+“ kokov v tvare zhlukov, ktoré sa nachádzajú vo forme zhlukov.

Bakteriologická metóda: Materiál sa naočkuje v slučke na agarové platne s krvou a žĺtkom a soľou, aby sa získali izolované kolónie. Plodiny sa inkubujú pri 37 °C počas 24 hodín. Nasledujúci deň sa vyrastené kolónie skúmajú na oboch médiách. Prítomnosť alebo neprítomnosť hemolýzy je zaznamenaná na krvnom agare. Na FSA tvorí S. aureus zlaté, okrúhle, konvexné, nepriehľadné kolónie. Okolo kolónií stafylokokov s lecitinázovou aktivitou sa vytvárajú zóny zákalu s perleťovým odtieňom. Aby sa definitívne stanovil typ stafylokoka, 2-3 kolónie sa subkultivujú do skúmaviek so šikmým živným agarom, aby sa získali čisté kultúry, po čom nasleduje stanovenie ich rozdielnych charakteristík. S.aureus – „+“: tvorba plazmakoagulázy, leticinázy. Fermentácia: glk, minnita, tvorba a-toxínu.

Na stanovenie zdroja nemocničnej infekcie sa od pacientov a nosičov baktérií izolujú čisté kultúry stafylokokov, potom sa fágovo typizujú pomocou sady štandardných stafylofágov. Fágy sa zriedia na titer uvedený na štítku. Každá zo študovaných kultúr sa naočkuje na živný agar v Petriho miske s trávnikom, vysuší sa a potom sa kvapka zodpovedajúceho fágu aplikuje v slučke na štvorčeky (podľa počtu fágov zahrnutých v súprave), vopred označené ceruzkou na spodok Petriho misky. Plodiny sa inkubujú pri 37 °C. Výsledky sa hodnotia nasledujúci deň na základe prítomnosti lýzy kultúry.

Sérologická metóda: v prípade chronickej infekcie sa stanovuje titer anti-a-toxínu v krvnom sére pacientov. Stanoví sa titer protilátok proti kyseline riboteichoovej (zložka bunkovej steny).

Liečba a prevencia. Širokospektrálne antibiotiká (penicilíny rezistentné na beta-laktamázu). V prípadoch ťažkých stafylokokových infekcií, ktoré sa nedajú liečiť antibiotikami, možno použiť antitoxickú antistafylokokovú plazmu alebo imunoglobulín imunizovaný adsorbovaným stafylokokovým toxoidom. Identifikácia a liečba pacientov; vykonávanie rutinného vyšetrenia zdravotníckeho personálu, očkovanie stafylokokovým toxoidom. Stafylokokový toxoid: získaný z natívneho toxoidu vyzrážaním kyselinou trichlóroctovou a adsorpciou na hydrát oxidu hlinitého.

Stafylokoková vakcína: suspenzia koaguláza-pozitívnych stafylokokov inaktivovaných teplom. Používa sa na liečbu dlhodobých chorôb.

Ľudský antistafylokokový imunoglobulín : gamaglobulínová frakcia krvného séra, obsahuje stafylokokový toxoid. Pripravené z človeka krvi, s vysokým obsahom protilátok. Používa sa na špecifickú liečbu.

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus- fakultatívne anaeróbne grampozitívne koky, nepohyblivé, kataláza a koaguláza pozitívne. Niektoré kmene S. aureus produkujú stafylokokové enterotoxíny (SE), ktoré spôsobujú otravu jedlom. Stafylokoky sú prítomné vo vzduchu, prachu, odpadových vodách, vode, mlieku, potravinách, ako aj na zariadeniach na výrobu potravín, na rôznych povrchoch v prostredí, na koži ľudí a zvierat. Hlavným rezervoárom infekcie sú ľudia a zvieratá. Stafylokoky sú prítomné v nosových a krčných dutinách, ako aj na vlasoch a pokožke najmenej 50 % zdravých ľudí. Staphylococcus aureus schopný rásť v širokom rozmedzí teplôt od 7 do 48,5°C (optimálne 30 - 37°C); pH 4,2 - 9,3 (optimálne pH 7,0-7,5) a pri vysokej koncentrácii chloridu sodného (do 15% NaCl). Tieto vlastnosti umožňujú baktériám kolonizovať širokú škálu potravín. Potraviny, ktoré najčastejšie spôsobujú stafylokokovú otravu jedlom, sú mäso a mäsové výrobky, hydina, vajcia, šaláty (s obsahom vajec, tuniaka, kuracie mäso, zemiaky, cestoviny), cukrovinky (napríklad smotanové koláče, čokoládové zákusky), plnky do sendvičov, mlieko a mliečne výrobky. Skutočným zdrojom stafylokokovej otravy jedlom tak môžu byť produkty, ktoré sú počas procesu prípravy značne dlhú dobu ručne spracovávané a následne skladované v teple.

Intoxikácia v dôsledku stafylokokovej infekcie

Príčina choroby sa vyrába Staphylococcus aureus toxínov, preto je ochorenie charakterizované veľmi krátkou inkubačnou dobou – zvyčajne od 0,5 do 6 hodín. Citlivosť pacienta na toxíny je určená stavom pacienta, koncentráciou toxínu a množstvom zjedených kontaminovaných potravín. Infekčná dávka môže byť nižšia ako 1,0 μg, čo zodpovedá približne 100 000 CFU/g produktu. Najčastejšími príznakmi ochorenia sú nevoľnosť, vracanie, averzie k jedlu, kŕče v bruchu a hnačka. Obdobie rehabilitácie zvyčajne trvá 1-3 dni, ale v závažných prípadoch môže úplné zotavenie trvať dlhšie. Choroba sa neprenáša na iných, pacienti musia užívať veľké množstvá kvapaliny.


Patogenita, rozsah ochorenia

Koagulózo-pozitívne stafylokoky sú gram-pozitívne katalázovo-pozitívne mikroorganizmy, ktoré tvoria typické kolónie na selektívnom diagnostickom živnom médiu, poskytujúce pozitívnu reakciu na koagulázu (S. aureus; S. aureus spp. anaerobius) alebo reakciu špecifickú pre králičiu plazmu na agare s králičou plazmou a fibrinogénom pri stanovení štandardnou metódou. Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) je koagulózne pozitívny stafylokok, ktorý tvorí acetoín a fermentáciu maltózy za aeróbnych podmienok počas stanovenia týchto biochemických testov pomocou štandardnej metódy.

Podľa nedávnych štúdií v rozvinuté krajiny zo všetkých známych infekcií vedie k smrti najčastejšie jedna z najznámejších, „obyčajných“ baktérií – Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus; všetky kmene stafylokokov, ktoré produkujú koagulázu, tzv. zlatá). Tento oportúnny mikroorganizmus je izolovaný od 15 – 30 % zdravých ľudí a prenos u väčšiny z nich je obmedzený na niekoľko mesiacov. Keď má pacient nedostatočnú imunitu, patogén spôsobuje početné život ohrozujúce zoonotické infekcie. Najčastejším toxickým stafylokokovým ochorením je otrava jedlom. Produkuje mnoho kmeňov Staphylococcus aureus enterotoxín. Tento jed spôsobuje hnačku, vracanie, bolesti a kŕče v bruchu. Podľa novozélandskej štúdie zomrelo 8,6 % detí hospitalizovaných so sepsou spôsobenou Staphylococcus aureus. Dermatovenerológovia v mnohých krajinách sú znepokojení nárastom počtu stafylokokových infekcií a úmrtí v dôsledku stafylokokov. Baktérie spôsobujú kazenie potravín, vrátane takzvaných „netrvanlivých“ potravín. Keď sa baktérie premnožia napríklad v tvrdom syre a saláme, produkujú toxíny. Sú najčastejšou príčinou závažnej otravy jedlom. Počas varenia stafylokok odumiera, ale jeho tepelne stabilné toxíny sa nezničia. Stafylokoky sú príčinou mnohých ľudských chorôb, vrátane srdcových chorôb (endokarditída a perikarditída) a muskuloskeletálnych chorôb (osteomyelitída a infekčná artritída). Na koži a mäkkých tkanivách spôsobuje stafylokok tzv syndróm šupinatej kože A celulitída, ktoré sú najbežnejšie infekčné choroby koža. Podľa WHO je Staphylococcus aureus na prvom mieste v zozname baktérií, ktoré sú najčastejšie infikované v zdravotníckych zariadeniach. Pri používaní intravenóznych katétrov a iných zdravotníckych pomôcok, ktoré prichádzajú do kontaktu s vnútorné prostredie telo. Rizikovým faktorom je aj umelé vetranie. Stafylokokové infekcie sa môžu vyskytnúť aj vtedy, keď sa nedodržiavajú bežné hygienické postupy v nemocnici. Celkovo predstavuje S. aureus asi 30 % všetkých „nemocničných infekcií“. Stafylokoky, ktoré prežívajú v podmienkach neustáleho používania dezinfekčných prostriedkov a používania antibiotík, sú vážnym rizikovým faktorom pre personál a základom nemocničných infekcií.


Taxonómia

Stafylokoky sú rodom sférických, nepohyblivých, asporogénnych, grampozitívnych, chemoorganotrofných, fakultatívne anaeróbnych alebo aeróbnych baktérií z čeľade Micrococcaceae. V rode Staphylococcus je asi 30 druhov, pričom 14 sa nachádza na ľudskej koži a slizniciach, vrátane S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus. Na identifikáciu druhov sa používajú hlavne 3 testy: produkcia plazmakoagulázy, anaeróbna fermentácia manitolu a glukózy. Antigénna štruktúra baktérie je komplexná, druhovo špecifickými antigénmi sú kyseliny teichoové.

Morfológia baktérií a kolónií

Bakteriálne bunky s priemerom 0,5-1,5 mikrónu sa delia asymetricky v niekoľkých rovinách a vytvárajú zhluky pripomínajúce strapce hrozna. Existujú jednotlivé bunky, páry a tetrády. Bunková stena obsahuje peptidoglykán a kyselinu glycerínteínovú. Stafylokoky tvoria hladké kolónie sfarbené karotenoidmi do žlta alebo oranžova. Pigmentácia však nie je druhovou charakteristikou. Pri pestovaní na žĺtkovo-soľnom agare sa vytvárajú zakalené, okrúhle, hladké kolónie krémovej, žltej alebo oranžovej farby. Pri kultivácii v tekutých médiách spôsobujú baktérie ich rovnomerný zákal a následne tvorbu sypkého sedimentu, ktorý sa mení na viskóznu hmotu.


Fyziologické a biochemické vlastnosti

Stafylokoky sú fakultatívne anaeróby, ale v prítomnosti kyslíka rastú rýchlo a hojne. Chemoorganotrofy s oxidačným a enzymatickým metabolizmom. Biochemicky veľmi aktívny. Produkujú katalázu, v prostredí s glukózou za anaeróbnych podmienok väčšina kmeňov tvorí acetoín (pozitívna Voges-Proskauerova reakcia). Pri pestovaní na arginínovej pôde uvoľňujú amoniak, redukujú dusičnany na dusitany alebo molekulárny dusík, aktívne hydrolyzujú bielkoviny a za aeróbnych podmienok štiepia mnohé sacharidy na kyselinu octovú a oxid uhličitý. Všeobecným znakom je fermentácia glukózy v anaeróbnych podmienkach, ktorá odlišuje stafylokoky od mikrokkov. Baktérie rastú na základných médiách pri 37°C (optimálne 35-40°C), ale môžu rásť v širšom teplotnom rozsahu (6,5÷46°C). Optimálny rast bol zaznamenaný pri pH 7,0-7,5, ale rast je možný v rozsahu pH=4,2÷9,3. Dobre znášajú vysoký osmotický tlak, preto sú pre nich elektívnym substrátom médiá s vysokou koncentráciou chloridu sodného – žĺtkovo-soľný alebo mliečno-soľný agar. Stafylokoky dobre tolerujú sušenie pri zachovaní virulencie; zomrieť priamym vystavením slnečné svetlo do 10-12 hodín. Docela odolné voči teplu: pri 70-80 o C zomrú za 20-30 minút, pri 150 o C - za 10 minút; suché teplo ich zabije do 2 hodín. Baktérie sú odolné voči pôsobeniu nízke teploty, opakované zmrazovanie a rozmrazovanie ich nezabije. Stafylokoky sú menej odolné voči pôsobeniu dezinfekčných prostriedkov (peroxid vodíka a pod.), ale odolné voči účinkom čistého etanolu. Pri pestovaní v aeróbnych podmienkach vyžadujú baktérie aminokyseliny a vitamíny, pri pestovaní v anaeróbnych podmienkach vyžadujú ďalšie zdroje uracilu a uhlíka. Na krvnom agare sa môže vytvoriť niekoľko druhov hemolyzíny- látky poškodzujúce červené krvinky, leukocyty a iné bunky. Produkujú tiež fibrinolyzín, fosfatázu a bakteriocíny; jednotlivé kmene produkujú koagulázu, DNAázu, H 2 S a enterotoxíny (až 10 druhov charakterizovaných letálnymi, hemolytickými alebo nekrotickými účinkami). Niektoré sacharidy sú fermentované, pričom sa uvoľňuje kyselina bez plynu. Odolný voči lyzozýmu, citlivý na rôzne antibiotiká. Druhy patogénne pre ľudí majú jeden zo 4 faktorov toxicity, ako sú: 1) exotoxín, 2) enterotoxín, 3) leukocidín, 4) koaguláza (enzým patogenity). Krížová rezistencia na antibiotiká je riadená plazmidom R. Tento odporový faktor sa prenáša na iné prokaryoty transdukciou.


Zdroje a faktory prenosu infekcie

Stafylokoky sú podmienene patogénne mikróby. Sú predstaviteľmi normálnej mikroflóry ľudí a zvierat - husto osídľujú rôzne biotopy tela (kožu, nosnú sliznicu a hltan, brušná dutina a axilárne oblasti). Stafylokoky sa do tela dostávajú cez kožu a sliznice vzdušnými kvapôčkami a vzdušným prachom. Mechanizmus infekcie je zvyčajne spojený s prenosom patogénu z miest kolonizácie na traumatizovaný povrch (napríklad na kožu). Významnú úlohu zohrávajú aj úzke kontakty s nosičmi a osobami trpiacimi stafylokokovými léziami. Stafylokok je odolný voči mnohým vonkajším vplyvom, preto sa nachádza v vonkajšie prostredie- vzduch (prach), pôda, na domácich predmetoch. Zdroje a faktory prenosu stafylokokovej infekcie sú viaceré. Hlavnými zdrojmi sú pacienti s vymazanými formami stafylokokovej infekcie alebo nosičmi, menej často chorými zvieratami, napríklad (v prípade otravy potravinovým stafylokokom a enterokolitídou) kravy s mastitídou. Najväčšie epidemiologické nebezpečenstvo predstavuje zdravotnícky personál, ktorý môže byť prenášačom nemocničných kmeňov stafylokokov. Stafylokoková infekcia je charakterizovaná množstvom mechanizmov, ciest a prenosových faktorov. Môžu sa prenášať baktérie kontakt prostredníctvom nesterilného lekárskeho nástroja rukami zdravotníckeho personálu, nutrične s mliečnymi výrobkami a cukrárskymi výrobkami, aerogénne a parenterálne(na injekcie).

Patogenéza

Citlivosť na stafylokoky je veľmi nízka u jedincov s normálnym imunitným stavom a zvýšená u hostiteľov s oslabenou imunitou. Veľmi často sa stafylokoková infekcia vyvíja na pozadí sekundárnych imunodeficiencií. Faktory patogenity patogénu sú mikrokapsula, zložky bunkovej steny, agresívne enzýmy a toxíny. Mikrokapsula chráni baktérie pred fagocytózou, podporuje adhéziu mikróbov a ich šírenie v tkanivách. Pri raste v in vitro netvorí sa. Komponenty bunkovej steny stimulujú rozvoj zápalových reakcií a neutralizujú imunoglobulíny, imobilizujú fagocyty. Kyseliny teichoové spúšťajú kaskádu kompliment(súčasť imunologických reakcií) alternatívnou cestou. Stafylokokový agresívny enzým koaguláza existuje v troch antigénnych formách a spôsobuje zrážanie krvného séra. Pri mnohých patologických stavoch tela stafylokoky opúšťajú svoje obvyklé biotopy, prekonávajú tkanivové bariéry a sú krvným obehom zavádzané do vnútorného sterilného prostredia tela. Tam spôsobujú typickú patologickú reakciu – zápal. Prejavuje sa vo forme purulentno-zápalových procesov rôznej lokalizácie a závažnosti, až po sepsu a septikopyémiu. Stafylokoky sú etiologickým faktorom chorôb, z ktorých veľká väčšina má purulentno-zápalovú povahu. Baktérie môžu infikovať takmer akékoľvek tkanivo tela. Infekcie spôsobené S. aureus sú rôznorodé a zahŕňajú viac ako 100 nozologických foriem vrátane chorôb: 1) kože a podkožného tkaniva(abcesy, zločinci, furunkulóza atď.), 2) dýchacie orgány(angína, zápal pohrudnice, zápal pľúc atď.), 3) nervový systém A zmyslových orgánov(meningitída, otitída, konjunktivitída atď.), 4) tráviace orgány(stomatitída, peritonitída, enteritída, enterokolitída, intoxikácia jedlom atď.), 5) pohybového aparátu A spojivové tkanivo(artritída, osteomyelitída), 6) krvný obeh(endokarditída, flebitída atď.), 7) genitourinárne orgány(cystitída, mastitída atď.), 8) stafylokoková sepsa. Tieto ochorenia môžu byť akútne alebo chronické. Otrava jedlom Klinicky sa prejavuje vo forme zvracania a vodnatej hnačky do 2-6 hodín po zjedení infikovaných potravín – cukrovinky so smotanou, konzervy, mäsové a zeleninové šaláty atď.


Detekčné metódy

Na selektívnych diferenciálnych médiách rastú spravidla iba kolónie stafylokokov. Izolácia stafylokoka v čistej kultúre nám umožňuje predpokladať stafylokokovú etiológiu ochorenia. Biomateriál na výskum sa vyberá v závislosti od klinického obrazu choroby. U kmeňov S. aureus izolovaných pri intoxikácii potravinovým stafylokokom sa prítomnosť enterotoxínov zisťuje biologickými a imunologickými testami. Tradičné metódy predbežné výsledky identifikácia stafylokokovej infekcie sa dá získať za 1-2 dni.

Klasická metóda

Metóda detekcie S. aureus je založená na vysiatí vzorky produktu a/alebo zriedení jeho vzorky do tekutého selektívneho média, inkubácii plodín, opätovnom nasadení kultivačnej tekutiny na povrch agarového selektívneho diagnostického média a potvrdení biochemické charakteristiky, že izolované typické a/alebo atypické kolónie patria S. aureus.


Strana 38 z 91

SÚKROMNÁ LEKÁRSKA MIKROBIOLÓGIA
PATOGENICKÉ KOKI
Medzi patogénne koky, ktoré spôsobujú rôzne klinické prejavy chorôb u ľudí, patria: 1) stafylokoky, 2) streptokoky, 3) pneumokoky, 4) meningokoky a 5) gonokoky.
Na základe ich farbiacich charakteristík (zafarbiteľnosti) ich možno rozdeliť do dvoch podskupín: grampozitívne koky (stafylokoky, streptokoky a pneumokoky), gramnegatívne koky (meningokoky a gonokoky).
Charakteristická vlastnosť každý patogénne koky je schopnosť vyvolať hnisavé zápalové procesy, preto sa nazývajú aj pyogénne (pyogénne) koky.
Pyogénne vlastnosti sú najvýraznejšie a neustále vyjadrené u stafylokokov.
STAPHYLOKOK
Morfológia a farbiace vlastnosti. Stafylokoky - Staphylococcus (prvýkrát izolovaný Pasteurom v roku 1880) majú tvar pravidelných guľôčok s priemerným priemerom 0,8-0,9 mikrónu. V nátere z čistej kultúry sa stafylokoky nachádzajú vo forme kôp a zhlukov, pripomínajúcich strapec hrozna (obr. 60). V hnise a inom patologickom materiáli možno často nájsť jednotlivé koky, párové koky a dokonca aj krátke reťazce. Dobre sa farbia základnými anilínovými farbivami, sú grampozitívne, netvoria spóry ani tobolky, sú nepohyblivé.
Kultúrne a biochemické vlastnosti. Stafylokoky rastú dobre na bežných živných pôdach v prítomnosti aj neprítomnosti voľného kyslíka. Optimálna teplota 37°.

Ryža. 60. Stafylokok (a) a streptokok (b) v čistej kultúre.


Ryža. 61. Kolónie stafylokokov na mäsovom peptónovom agare. Uv. 20.

Ryža. 62. Výsev injekciou do želatíny.

Jednotlivé kolónie na povrchu agaru sú zaoblené disky priemerná veľkosť, konvexná, vlhká, nepriehľadná, homogénna alebo jemnozrnná štruktúra (pozri obr. 01). Farba kolónií závisí od pigmentu, ktorý stafylokoky produkujú a môže byť zlatá (Staphylococcus aureus), citrónovo žltá (Staphylococcus citreus) a biela (Staphylococcus albus). Keď sa nanesie na šikmé agary, vytvorí sa bohatý rast pigmentovaných stafylokokov.
Stafylokokové pigmenty sú lipochrómy, nerozpustné vo vode a farbia iba kultúru, nie však živné médium. K tvorbe pigmentu dochádza intenzívne, keď mikroorganizmy rastú v prítomnosti kyslíka, pri izbovej teplote, na svetle.
Pri výseve injekciou do želatíny v 2. – 3. deň rastu je na povrchu média viditeľná skvapalňovacia zóna. Kultúra skvapalnením padá na dno vo forme vatovitého sedimentu (obr. 62).
Stafylokoky rastú hojne v bujóne. Po 24 hodinách v termostate sa vývar zakalí a na dne skúmavky sa vytvorí sediment.
Stafylokoky rýchlo zrážajú mlieko a dávajú mu kyslú reakciu.
Fermentuje (bez plynu) laktózu, glukózu, maltózu, manitol. Schopnosť rozkladať manitol zvyčajne charakterizuje patogénne kmene stafylokokov.
Patogénne stafylokoky na krvných agarových platniach tvoria kolónie obklopené zónou hemolýzy a koagulujú citrátovú krvnú plazmu.
Odpor. Stafylokok patrí medzi veľmi perzistentné mikróby. Teplota 80° ho za mokra zabije do 10 minút. Stafylokoky vydržia teplotu 70° až 1 hodinu. Kyselina karbolová (3-5% roztok) ich zabíja do 15-30 minút. Stafylokok dlhodobo pretrváva v hnise.
Toxíny, enzýmy stafylokokov, ich patogenita pre zvieratá. Patogénne stafylokoky produkujú množstvo toxínov a enzýmov. Stafylokokový hemolyquin rozpúšťa červené krvinky. Tento toxín je termolabilný (zničí sa pri 55°C), je klasifikovaný ako exotoxín a imunizáciou zvierat ním možno získať antitoxín. Filtrát stafylokokových kultúr má tiež nekrotický a smrteľný účinok. Teraz sa dokázalo, že hemolyzín, nekrotoxín a letálny toxín sú zložkami jediného stafylokokového exotoxínu. Tieto toxíny sú od seba neoddeliteľné a detekcia jedného z nich slúži ako dôkaz patogenity izolovaného stafylokoka. Niektoré z hemolytických kmeňov Staphylococcus aureus produkujú enterotoxín, ktorý spôsobuje akútnu gastroenteritídu. Vo filtrátoch stafylokokových kultúr sa často nachádza leukocidín, jed, ktorý ničí biele krvinky. Z enzýmov vylučujú patogénne stafylokoky: 1) plazmakoagul az u - zrážacia plazma, 2) fibrinolyzín - rozpúšťanie fibrínových zrazenín, 3) hyaluronidáza - rozpúšťajúca kyselina hyalurónová, látka lepiaca prvky spojivového tkaniva, 4) penicilináza - inaktivujúca penicilín a 5) lecitináza - tvoriaca zóna zákalu okolo kolónií na žĺtkovo-soľnom agare (Chistovichovo médium).
Z laboratórnych zvierat sú na stafylokoky najcitlivejšie a v menšej miere králiky morčatá a myši. U králikov sa pri intradermálnom podaní kultúry objavuje výrazná nekróza, pri subkutánnom podaní vznikajú abscesy a infekcia vysoko virulentnými kmeňmi stafylokokov vedie k sepse a smrti zvierat. Najcitlivejšie na stafylokokový enterotoxín sú dojčiace mačiatka a mladé myši.
Klasifikácia stafylokokov. Stará klasifikácia stafylokokov podľa pigmentu, ktorý vylučujú (zlatá, biela a citrónová žltá), neumožňuje správne určiť ich patogenitu. Preto sa klasifikácia stafylokokov navrhovaná Grossom v súčasnosti považuje za najsprávnejšiu. Podľa tejto klasifikácie sú všetky stafylokoky rozdelené do troch skupín: patogénne, slabo patogénne a nepatogénne.
Prvou skupinou sú patogénne stafylokoky:
a) na platniach s 5 % krvným agarom tvoria číru zónu hemolýzy;
b) pri intradermálnom podaní králikovi spôsobujú javy výraznej nekrózy, niekedy končiace smrťou zvieraťa;
c) produkujú enzým plazmakoaguláza, ktorý do 2 hodín spôsobí zrážanie plazmy;
d) sú izolované najmä od pacientov so sepsou alebo akútnou hnisavou infekciou.
Druhou skupinou sú slabo patogénne stafylokoky:
a) na krvných agarových platniach tvoria zónu miernej neúplnej hemolýzy;
b) pri intradermálnom podaní králikovi spôsobuje začervenanie kože v mieste vpichu, niekedy infiltráciu, častejšie bez nekrózy;
c) ak sú inokulované v citrátovej plazme, spôsobujú koaguláciu do 6 hodín alebo neskôr;
d) sa uvoľňujú z povrchu kože pri folikulitíde, zo slizníc pri kataroch horných dýchacích ciest, z povrchu rán, nie však z ich hĺbky.
Treťou skupinou sú nepatogénne stafylokoky:
a) hemolýza sa na platniach s krvným agarom nezistila;
b) pri intradermálnom podaní králikovi nie sú pozorované javy nekrózy a infiltrácie, v niektorých prípadoch sa objavuje začervenanie kože;
c) plazmatická koagulačná reakcia je negatívna;
d) sa neustále nachádzajú na zdravej koži, na slizniciach hrdla, nosa a vo vzduchu.
Patogenéza a choroby u ľudí. Stafylokoky sú veľmi rozšírené mikróby. Nachádzajú sa vo vzduchu, vode a pôde, u ľudí - takmer neustále na koži a slizniciach. To vysvetľuje skutočnosť, že stafylokok je najčastejším pôvodcom všetkých druhov hnisania. Poškodenie kože a slizníc alebo zníženie ich odolnosti otvára „bránu“ stafylokokovej infekcii.
Najčastejšie je postihnutá koža. Stafylokoky sú pôvodcami varu - hnisavého zápalu vlasových folikulov. Ak sa vriedky stanú viacnásobnými, choroba sa nazýva furunkulóza. Keď sa niekoľko vriedkov spojí a vytvorí rozsiahlejší hnisavý infiltrát, vznikne karbunka.
Stafylokoky sa nachádzajú v abscesoch (vredy), v hnisavých ranách, pri kataroch slizníc, septikémii a septikopyémii (sepsa s tvorbou hnisavých ložísk vo vnútorných orgánoch). Enterotoxické kmene Staphylococcus aureus môžu spôsobiť otravu jedlom. Tie sú pozorované v dôsledku konzumácie mlieka kontaminovaného stafylokokmi a iných mliečnych výrobkov, smotanových koláčov atď., pretože stafylokok v týchto výrobkoch nachádza optimálne podmienky pre svoje rozmnožovanie. Patogénne stafylokoky sa môžu dostať do mlieka buď od kráv s mastitídou, alebo z rúk dojičiek trpiacich pyodermou.
Imunita. Vrodená imunita voči stafylokokom u ľudí neexistuje. Ľudia však majú voči tomuto mikroorganizmu výraznú odolnosť, čo sa vysvetľuje ochrannou úlohou kože a prítomnosťou protilátok v krvi.
Zrejme môže nastať získaná imunita, o čom svedčí zvýšenie titra protilátok u pacientov a tých, ktorí sa z choroby vyliečili. Táto imunita je však krehká. Okrem toho sa zistilo, že mnohí ľudia, ktorí mali furunkulózu, majú zvýšenú náchylnosť na stafylokoky.
Odolnosť voči stafylokokom môže byť oslabená z rôznych dôvodov – cukrovka, úraz, vysiľujúce choroby atď.
Mikrobiologická diagnostika. Vyšetrenie hnisu. Najčastejšie je materiálom na mikrobiologický výskum hnis. Na tento účel sa v prípade otvorených lézií po predbežnom očistení povrchu rany sterilným vatovým tampónom odstráni výtok z hlbších častí rany. V prípade uzavretých procesov (furuncle, absces) sa na ten istý účel po dezinfekcii pokožky vykoná punkcia zdroja hnisania sterilnou striekačkou. Z výsledného hnisu sa vyrobia šmuhy, zafarbia sa modrou a Gramovou farbou a skúmajú sa pod mikroskopom.
Je ťažké rozlíšiť stafylokoky a streptokoky na základe lokalizácie kokov a tinktorických vlastností, preto pristupujú k bakteriologickému vyšetreniu, t.j. naočkovaniu hnisu na platne s jednoduchým krvným agarom, na agar so žĺtkom a soľou (pozri časť „Sanitárna mikrobiológia“ s. 454) a na obohacovacom médiu (cukrový bujón). Nasadené poháre sa otočia hore dnom a vývar sa umiestni do termostatu pri 37 ° na 1-2 dni.
Na krvných agarových platniach tvoria kolónie zóny hemolýzy, ktorých priemer je často niekoľkonásobkom priemeru kolónie. Tieto číre, bezfarebné zóny hemolýzy sa vytvorili v dôsledku rozpustenia červených krviniek spôsobeného stafylokokovým hemotoxínom. Na platniach so žĺtkovo-soľným agarom rastú patogénne stafylokoky s tvorbou zlatého pigmentu a zakalenej zóny - vo forme dúhovej koruny okolo kolónie. Z jednej z kolónií sa pripraví prípravok, zafarbí sa Gramom a vyšetrí sa pod mikroskopom. Detekcia grampozitívnych kokov v prípravku, usporiadaných vo forme strapcov hrozna, dáva právo vydať indikatívny pozitívny výsledok. Zvyšok kolónie sa potom subkultivuje na šikmom agare, aby sa získala čistá kultúra. Je potrebné odlíšiť patogénny stafylokok od nepatogénneho, t.j. študovať rast na krvnom agare, žĺtkovo-soľnom agare, naočkovať ho do nitrátovej plazmy a stanoviť toxigenitu u zvierat.
Plazmatický koagulačný test. Pre plazmatickú koagulačnú reakciu G.V. Vygodchikov odporúča nasledujúcu techniku. Zo srdca králika sa odoberie 10 ml krvi a umiestni sa do skúmavky s 1 ml 5 % roztoku citrátu sodného. Krv sa odstredí a plazma sa odsaje. Pred experimentom sa výsledná plazma zriedi fyziologickým roztokom 1:4 a naleje sa do sterilných skúmaviek s objemom 0,5 ml. Kolónie stafylokokov sa naočkujú slučkou do skúmaviek s dusičnanovou králičou plazmou, umiestnia sa do termostatu pri 37° a každé 2-3 hodiny sa kontroluje koagulácia plazmy. Patogénne stafylokoky koagulujú plazmu do 2-10 hodín, najčastejšie do 4 hodín.
Test toxikogenity. Toxigenita stafylokokových kultúr je určená skúsenosťami na králikoch a enterotoxín je určená skúsenosťami na dojčených mačiatkach. Zo stafylokokového agaru na šikmom agare sa pripraví suspenzia mikróbov vo fyziologickom roztoku a stanoví sa podľa optického štandardu s výpočtom 2 miliárd mikrobiálnych teliesok v 1 ml suspenzie. Srsť na boku alebo chrbte králika sa vytrhne a zvieraťu sa intradermálne vstrekne 0,2 ml mikrobiálnej suspenzie. Ak je reakcia pozitívna, v mieste vpichu sa vytvorí infiltrát a následne nekróza.
Na detekciu letálneho toxínu sa králikovi intravenózne injikuje filtrát kultúry stafylokokov v množstve 0,75 ml na 1 kg hmotnosti. Smrť zvieraťa nastáva do 15 minút.
Na stanovenie enterotoxínu sa mačiatkam vo veku 1,5-2 mesiacov (s hmotnosťou 400 g) kŕmia pôvodným kontaminovaným produktom alebo mliečnou kultúrou stafylokoka. Príznaky otravy (hnačka, niekedy zvracanie) sa objavia v priebehu 30-60 minút. Pozorovanie sa vykonáva 4-6 hodín, a ak počas tejto doby mačiatka nevykazujú žiadnu reakciu, biologický test sa považuje za negatívny.
Krvný test. Pri podozrení na sepsu sa pacientovi odoberie 10 ml krvi z loketnej žily pomocou sterilnej striekačky a naočkuje sa 100-200 ml cukrového bujónu. Plodiny sa umiestnia do termostatu na obohatenie na 24 až 48 hodín. V pozitívnom prípade sa médium zakalí a v náteroch z neho sa nachádzajú grampozitívne koky s charakteristickým tvarom a lokalizáciou. Bujón sa naočkuje do misky s krvným agarom a uskutoční sa ďalší výskum, ako je opísané vyššie. Bujón sa uchováva v termostate 10 dní, každé 2 dni sa vysieva na 5% krvný agar.
Výskum iných materiálov. Pri skúmaní kontaminovaných materiálov veľké množstvo cudzích mikróbov (výkaly, spútum), odporúča sa použiť agar so 7,5 % chloridom sodným, do ktorého sa pridá 10 % teplého odstredeného mlieka (Petrovichovo médium). Na takomto agare je výrazne potlačený rast cudzej mikroflóry.
Fagotypizácia. Pri fagotypizácii sa používa súbor typických stafylokokových fágov pozostávajúci z 21 fágov, rozdelených do štyroch skupín. Každý typický fág je schopný množiť sa len na svojom zodpovedajúcom kmeni stafylokoka. Fagotypizácia stafylokokov má zvláštny význam so sa-
sanitárne a bakteriologické vyšetrenie potravinových výrobkov s cieľom identifikovať zdroj infekcie a stanoviť epidemické súvislosti.
Špecifická terapia a chemoterapia. Stafylokoková vakcína sa široko používa na liečbu opakujúcich sa a chronických infekcií, ako je furunkulóza. Na prevenciu týchto ochorení sa používa toxoid.
Pri liečbe stafylokokových infekcií sa úspešne používajú aj chemoterapeutiká sulfónamidovej série (norsulfazol, sulfodimezín atď.), Antibiotiká (penicilín vo veľkých dávkach, erytromycín, oxacilín atď.), Stafylokokový bakteriofág (na kožné lézie). Pri ťažkej stafylokokovej sepse sa odporúča hyperimúnna antistafylokoková plazma a gamaglobulín získané od darcov imunizovaných toxoidom.

100 RUR bonus za prvú objednávku

Vyberte typ práce Diplomová práca Predmetová práca Abstrakt Diplomová práca Practice report Article Report Review Test Monografia Riešenie problémov Podnikateľský plán Odpovede na otázky Kreatívna práca Esej Kreslenie Eseje Preklad Prezentácie Písanie Iné Zvýšenie jedinečnosti textu Diplomová práca Laboratórne práce Online nápoveda

Zistite si cenu

Stafylokokóza v nemocniciach 40-60%

V súčasnosti už rod Staphylococcus nepatrí do čeľade Micrococcaceae (od začiatku 90. rokov). Čeľaď Micrococcaceae neexistuje (pretože medzi jej zložkami neexistuje genetická príbuznosť). Boli zjednotené len na základe grampozitívnych aeróbnych a fakultatívne anaeróbnych kokov, ktoré sa delili v niekoľkých rovinách.

Mikrokok je genetický príbuzný aktinomycét.

Stafylokok je genetický príbuzný klostrídie.

Pri výskume fusobaktérií, rightelly, bacteroides (prísne anaeróby) v prostredí bez kyslíka, ak nepoužijete médium s antibiotikami (aminoglykozidy), tak stafylokoky (a enterobaktérie) zabijú všetko!!!

Vyčerpávajúci spôsob siatia


Stafylokoky sú fakultatívne anaeróby. Micrococcus – prísne aeróby

Diferenciácia – test s aeróbnym a anaeróbnym rozkladom glukózy. Všetka Staphylococcus glukóza+ bez plynu pod vazelínovým olejom. Micrococcus - nie.

Staphylococcus - viac ako 30 druhov, so 44 poddruhmi, ktoré sa rozlišujú pomocou 33 testov.

Hranica halotolerancie je prostredie s 7,5 % a viac NaCl.

Mikrokok - stále rastie na 6,5% a iba stafylokok je vyšší. (ZhSA – 10 % NaCl). Niektoré typy 15% NaCl.

Mliečno-soľný agar – mikrokoky rastú, pretože NaCl je tam nižšie.

Buržoázia používa Chapmanovo médium - manitol-soľný agar (1% manitol) - 7,5% NaCl. Manitol = manitol, ako glycerol = glycerol

Cielená izolácia stafylokokov (napríklad počas sanitárnych a bakteriologických štúdií). Zóna žltnutia v dôsledku tvorby kyseliny. Ako alternatívu máme ZhSA.

Tie. ak izolujeme koky v médiu s ≥ 7,5 NaCl, potom sú vždy glukóza+, pretože toto je Staphylococcus a Micrococcus nerastie

Morfológia mikrokokov sa mierne líši od stafylokokov - kolónií aj buniek väčší než stafylokoky.

Každý človek má na koži 7-10 druhov mikrokokov (a celkovo je ich asi 15 druhov), prevláda M. luteus - veľké žlté kolónie na neinhibičných médiách (starý názov je air sarcina, pravá sarcina nerastie v aeróbne podmienky!!!). Farbia rovnomerne podľa Gram. Vo forme hromád, zošitov, balíkov. Ostatné sú biele, bezfarebné atď. M.livi – email-biela. M.cristi - červené kolónie.

Staphylococcus sa farbí nerovnomerne podľa Grama (kaliko škvrna). Zhluky – najčastejšie vyrába S. aureus, ďalej kopy, tetrády, vrecia a pod. Stafylokoky s tekutými usadeninami - jednotlivé, páry, skupiny.

Na médiách bez žĺtka sa pigment S. aureus netvorí a kolónie sú sivé.

Karotenoidy sa nerozpúšťajú vo vode a prostredie okolo kolónie nie je u Staphylococcus a Micrococcus nikdy zafarbené.

Angelina Hess - zaviedla agar do médií v polovici 19. storočia

Mikrokok je tiež UPMF - sepsa. In vitro citlivý na všetko. U zvierat penicilín - 5 jednotiek na injekciu - na úrovni vynálezu penicilínu - lieči sepsu. Ale liečba in vivo je veľmi náročná. Sepsa u pacientov po operácii srdcového bypassu. Ak skončia v prístroji srdce-pľúca.

Planococcus – nemáme záujem – o morská voda a nie sú nebezpečné pre ľudí

Stomatokoky - 1 druh. Rastú dobre na KA (na KA môže rásť čokoľvek), ale nerastú v soľných médiách. Nemajú osobitný klinický význam. UPMF. Gingivitída a stomatitída sú veľmi zriedkavo spôsobené (ale častejšie sú tieto ochorenia spôsobené anaeróbmi a vírusmi).

S. aureus subsp. aureus

S. aureus subsp. anaeróbne - nerastie za aeróbnych podmienok (prísne anaeróbne)

Medzi stafylokokmi nie sú žiadne saprofyty - všetko oportunistické. Viac ako 86 nozologických foriem ochorení.

S. aureus a S. epidermidis – každý po 45 % všetkých stafylokokov. Otrava jedlom - iba S. aureus (S. epidermidis - môže spôsobiť len u dojčiat). Enterotoxíny produkuje iba S. aureus.

Každý človek má na koži 10-12 druhov stafylokokov.

Hlavným biotopom sú predné časti nosa. Na jednotku plochy je všetkého viac.

S. epidermidis môže tiež spolu so S. aureus spôsobiť prepuknutie nozokomiálnych infekcií.

U novorodencov: konjunktivitída S. epidermidis skôr v Moskve v 70. rokoch; teraz v nemocnici získaná pneumónia S. epidermidis.

Plazmidy sa prenášajú rýchlosťou asi 2 hodiny (stafylokok strávil 2 hodiny na koži inej osoby a dostal nový plazmid).

Preprava.

V materských zariadeniach sa rutinné testovanie na stafylokoka nevykonáva (iba počas prepuknutia choroby) - objednávka 345. Chirurgický profil má stále 720 objednávok (nerealizovaných nikde vo svete). Počet stafylokokových infekcií je rovnaký medzi „buržoáziou“ aj medzi nami, bez ohľadu na hygienu.

Pomocou testovacích systémov je možné rozlíšiť až 12-15 druhov stafylokokov a niekoľko typov mikrokokov.

Zrušených bolo 691 objednávok pre pôrodnice. Nový rozkaz 345 nemá bakteriologickú časť, takže v bakteriológii sa stále všetci riadia rozkazom 691.

Plánované vyšetrenie na prenášanie stafylokoka bolo zrušené.

V súčasnosti existuje 5 typov koaguláza-pozitívnych stafylokokov.

koaguláza

maltóza

flokulácia

Hemolýza na KA s ľudskou krvou

Hodinový deň

takmer 100%

± menej ako 50 %

Č/B noc

S. aureus neprodukuje koagulázu veľmi zriedkavo - počas primárnych kultivácií od pacienta s masívnou antibiotickou terapiou. Preto kĺb rekultivujeme a potom opäť pridávame plazmu. Ak nie, nie je to S. aureus.

Pigment na médiách s vysokým obsahom bielkovín a svetlom (WSA, srvátkové proteínové médiá)

Medzi koaguláza-negatívnymi stafylokokmi môžu niektoré tvoriť aj pigment. S promageny – tvorí žltý pigment na akomkoľvek médiu

Acetoín=acetylmetylkarbinol – VP (Voges-Proskauer) reakcia

Jeho médium s glukózou je polotekuté. Pri výseve z fyziologického média sú vždy pozitívne na glukózu, aspoň v hornej časti stĺpca.

Konečná negatívna odpoveď na polotekuté His médium s glukózou sa dáva až na 5. deň.

Ak je tam plynatosť, predpokladáme, že ide o zmiešaného alebo vôbec nie o stafylokoka.

Polotekuté médium s manitolom bolo vylúčené v roku 1974 - konečná negatívna odpoveď bola až na 5. deň. Položený len na pohári – odpoveď je na druhý deň ráno.

Pevné médium s glycerínom (1%) (možno nahradiť akýmkoľvek cukrom a alkoholom). Kvapalné a polotekuté médiá sa nikdy nepoužívajú na rozlíšenie v rámci rodov Staphylococcus a Micrococcus. Indikátor – brómtymolová modrá, pH – neutrálne; alebo bromokrezolová červeň, brómtymolová červeň. Vysievame do plakov - až 10 plodín na pohár. Radiálny pásik - až 6 plodín na pohár. Okolo stafylokoka je žltnutie. Mikrokoky nevyužívajú glycerín.


S. aurecularis v testovacích systémoch je na 95 – 99 % podobný S. aureus a dá sa rozlíšiť len podľa plazmatickej koagulačnej reakcie.

Koaguláza-negatívne stafylokoky

Za určitých podmienok môžu produkovať pigment.

U stafylokokov nie je možné vykonať druhovú diferenciáciu na základe 1-2 testov.

Existuje len 6-7 druhov, ktoré rastú v plazme vo forme vločiek manitolu+.

koaguláza

Alkalický fosfát

trehalóza

Viac ako 20 % kmeňov

5-10% kmeňov

95-100% kmeňov

5 % kmeňov

S. saprophyticus

5 % kmeňov

100 % S. aureus má hemolytickú aktivitu.

S. saprophiticus je veľmi zriedkavý. Cystitída a uretritída u žien mladý- citlivý na antibiotiká a chemoterapeutické lieky

Koaguláza-negatívne sa nemôžu stať koaguláza-pozitívne.

S. epidermidis nie je nikdy koaguláza-pozitívny, bez ohľadu na to, čo je napísané v poradí 720

Bunka bez spór môže žiť 10-12 dní.

Alkalická fosfatáza je charakteristická len pre S. epidermidis.

Alkalická fosfatáza - paranitrofenol fosfát alebo fenolftaleín fosfát z testov na ALP v biochémii - 50 mg na 100 ml agaru, do 20 kmeňov na misku.

Paranitrofenol fosfát → paranitrofenol (žltý) a farba média je citrónovo žltá.

Fenolftaleín fosfát → fenolftaleín (bezfarebný). Alkalizujeme 3-10% roztokom amoniaku (kvapkáme na viečko pohára) Kolónie sú karmínové.

Môžete si kúpiť 10% roztok fenolftaleínfosfátu. V chladničke vydrží roky. 0,5 ml roztoku na 100 ml agaru.

S. epidermidis je prirodzene citlivý na novobiocín.

Lecitoviteláza (žĺtkový faktor) – in medzinárodná klasifikácia nepoužívané, iba u nás.

20-25 % S. epidermidis je pozitívnych na lecitinázu.

80 % S. aureus – ľudského pôvodu – produkuje lecitovitelázu. Lecitín-negatívny S. aureus – zo zvierat.

Iné stafylokoky môžu tiež dať. Teda ak lecitoviteláza+, tak je to 80% S. aureus, 20% ostatné stafylokoky.

LSA poháre na prenos - clearing zone (protease) - to nie je pre nás dôležité.

Zákal - prevládajú lipázy - tiež nie sú dôležité.

Buržoázne krvné médiá sú vyrobené z ovčích erytrocytov. Predpokladalo sa, že ľudské kmene S. aureus produkujú iba α-hemotoxín, ale teraz existuje aj β-hemotoxín. To sa dá určiť len pomocou ovčích červených krviniek.

β-hemotoxín dáva po dni zónu neúplnej hemolýzy a ak ho potom dáte do chladničky do konca pracovného dňa, zóna sa úplne vyčistí.

S. aureus produkuje 2 enzýmy

1) termolabilná DNáza (nukleáza) - majú ju všetky stafylokoky a väčšina ostatných mikróbov.

2) Termostabilná DNáza (nukleáza) – nachádza sa len v S. aureus. Neničí sa varom alebo dokonca krátkodobým autoklávovaním.

A podľa našich objednávok sa deteguje iba termolabilná DNáza (bez bodu).

Vo vyhrievanom jedle (pri skrytí skutočnosti PTI) sa stafylokok zničí, ale toxíny zostávajú. Prítomnosť termostabilnej DNázy môže určiť, či bol prítomný S. aureus.

Podľa objednávok je vysoko polymerizovaná DNA 1-2 mg na 1 ml média (pH = 8,0). Výsev taniera s plakmi (alebo injekciou). 24 hodín. Rozvinieme ju tak, že pohárik naplníme 3N HCl, vytvorí sa zrazenina DNA s HCl a tam, kde zapracovala DNáza, vidíme číriacu zónu. U S. aureus je jeho polomer 10-12 mm, u S. epidermidis je jeho polomer 4-5 mm. Okolo otvoru s usmrtenou kultúrou S. aureus – 7-8 mm.

S. epidermidis produkuje iba tepelne labilnú DNázu, S. aureus produkuje obe DNázy – zóna je väčšia.

Obsah témy "Grampozitívne koky. Stafylokoky.":









Mikrobiologická diagnostika Staphylococcus aureus. Mikroskopia Staphylococcus aureus. Izolácia Staphylococcus aureus. Koagulázový test.

Mikroskopia Staphylococcus aureus. Detekcia nahromadenia grampozitívnych kokov a polymorfonukleárnych leukocytov počas vyšetrenia zafarbených náterov klinického materiálu môže slúžiť ako základ pre predbežnú diagnózu. Malo by sa pamätať na to, že výsledky mikroskopie nemožno považovať za dostatočné na vydanie konečného záveru.

Izolácia Staphylococcus aureus

Kultúra Staphylococcus aureus uskutočňované na jednoduchých živných médiách, zvyčajne tio-glykolovom médiu a CA. Ak existuje riziko kontaminácie vzorky, používajú sa diferenciálne diagnostické médiá. Najčastejšie sa používa mliečno-soľný (alebo mliečno-žlto-soľný) agar a soľný agar s manitolom, na ktorých je rast kontaminujúcej mikroflóry brzdený vysokou koncentráciou NaCl. Navyše mliečny soľný agar (MSA) demonštruje schopnosť vytvárať pigment a rozkladať lecitín (lekitotelázová aktivita). IN V poslednej dobe Agar s kolistínom a kyselinou nalidixovou našiel široké použitie ako diferenciálne diagnostické médium.

Po 18-24 hodinách Staphylococcus aureus (S. aureus) tvorí hladké konvexné zakalené kolónie s priemerom asi 4 mm. Baktérie syntetizujú žltý pigment; farba kolónií sa mení od bielej po oranžovú. Na CA sú kolónie S. aureus obklopené zónou úplnej hemolýzy (obr. 1, pozri farebnú prílohu).

Staphylococcus dobre rastú v bujóne, najprv spôsobia, že sa rovnomerne zakalí a potom sa vytvorí voľný, vločkovitý sediment. Dávajú veľmi charakteristický rast v želatíne; po 24-28 hodinách (spolu s bohatým rastom pozdĺž vpichu mikrobiologickej ihly) sa pozoruje počiatočné skvapalnenie média a na 4.-5. deň sa vytvorí lievik otvorený smerom nadol, naplnený skvapalneným médiom.

Na vnútrodruhovú diferenciáciu Staphylococcus aureus (S. aureus) používa sa koagulázový test (na prítomnosť faktora zrážanlivosti), ktorý je pozitívny u 95 % izolátov (obr. 12-3). Existuje niekoľko ďalších rozlišovacích znakov.

Schopnosť fermentovať manitol za anaeróbnych podmienok.
Aktivita lecitotelázy je tvorba perleťovej „koruny“ zrazeniny obklopujúcej kolónie pestované na médiu s prídavkom vaječného žĺtka. Zrazenina pozostáva z fosforylcholínu, ktorý vzniká z lecitínu z vaječného žĺtka pôsobením enzýmu.
Schopnosť syntetizovať termostabilnú DNázu.
Schopnosť aglutinovať senzibilizované ovčie červené krvinky (posledný test deteguje proteín A, koagulačný faktor alebo oba produkty).

Pre expresnú identifikáciu Staphylococcus aureus (S. aureus) použite latexový aglutinačný test s použitím komerčných súprav latexových častíc naplnených AT, ako je Staphylatex (American Microscan).