1. Стафилококки, их свойства. Классификация, факторы патогенности стафилококков. Заболевания, вызываемые стафилококками. Эпидемиология и особенности госпитальных штаммов стафилококков. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия .

Наиболее известны:

    Стафилококк золотистый (Staphylococcus aureus), как наиболее патогенный для человека. Назван по способности образовывать золотистый пигмент. Может вызывать у человека гнойные воспалительные процессы почти во всех органах и тканях.

    Стафилококк эпидермальный (Staphylococcus epidermidis) - часто встречается на коже и слизистых оболочках человека, может вызывать сепсис, эндокардит, конъюнктивит, гнойную инфекцию ран и гнойные инфекции мочевыводящих путей.

    Стафилококк сапрофитный (Staphylococcus saprophyticus) - может вызывать острый цистит и уретрит.

Таксономия: относятся к от­делу Firmicutes, семейству Мicrococcacae, роду Staphylococcus. К данному роду относятся 3 вида: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus.

Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются не­симметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некото­рых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы.

Культуральные свойства : Стафилококки - факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не име­ющим таксономического значения. Могут расти на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитичес-

кими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу.

Стафилококки пластичны, быстро приобретают устой­чивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерми­нируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы.

Антигенная структура . Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент оста­ется свободным и может соединяться со специфическим анти­геном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена повер­хностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков явля­ются лизогенными(образование некоторых токсинов происхо­дит с участием профага).

Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков.

Резистентность. Устойчивость в окружа­ющей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная.

Патогенез. Источником инфекции стафилококков - человек и некоторые виды животных (больные или но­сители). Механизмы передачи - респираторный, контактно-бы­товой, алиментарный.

Иммунитет: П остинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненажряженный.

Клиника. Около 120 клинических форм прояв­ления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гной­но-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглот­ки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (инток­сикации).

Микробиологическая диагностика . Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения.

Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие грам «+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.

Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течении суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламут­ровым оттенком. Для окончательного установления вида ста­филококка 2-3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последую­щим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, летициназы. Ферментация:глк, миннита, образование а-токсина.

Для установления источника госпитальной инфекции выде­ляют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионо­сителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указан­ного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а за­тем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно разме­ченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по нали­чию лизиса культуры.

Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте(компонент клеточной стенки).

Лечение и профилактика . Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитокси­ческая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизи­рованный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой и адсорбцией на гидрате оксида алюминия.

Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний.

Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый : гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus - факультативно анаэробные грамположительные кокки, неподвижные, каталазо- и коагулазоположительные. Некоторые штаммы S. aureus продуцируют стафилококковые энтеротоксины (SEs), вызывающие пищевые отравления. Стафилококки присутствуют в воздухе, пыли, сточных водах, воде, молоке, продуктах питания, а также на оборудовании пищевых производств, на различных поверхностях в окружающей среде, на кожных покровах людей и животных. Именно люди и животные являются основным резервуаром инфекции. Стафилококки присутствуют в полостях носа, и горле, а также на волосах и кожном покрове по крайней мере у 50% здоровых людей. Staphylococcus aureus способен расти в широком диапазоне температур от 7 до 48,5°С (оптимум 30 - 37°С); рН 4,2 - 9,3 (оптимум рН 7,0-7,5) и при высокой концентрации хлорида натрия (до 15% NaCl). Такие свойства позволяют бактериям заселять самые разнообразные продукты. Продукты, наиболее часто являющиеся причиной стафилококковых пищевых отравлений - это мясо и мясопродукты, мясо птицы, яйца, салаты (содержащие яйцо, тунец, курицу, картофель, макароны), кондитерские изделия (например, пирожки с кремом, шоколадные эклеры), начинка сэндвичей, молоко и молочные продукты. Таким образом, продукты, которые в процессе приготовления значительное время обрабатыватся вручную и впоследствии хранятся в тепле, могут быть реальным источником стафилококковых пищевых отравлений.

Интоксикация при стафилококковой инфекции

Причиной болезни являются продуцируемые Staphylococcus aureus токсины, поэтому заболевание характеризуется очень коротким инкубационным периодом - обычно от 0,5 до 6 часов. Восприимчивость больного к токсинам определяется состоянием больного, концентрацией токсина и количеством съеденного зараженного продукта. Инфекционная доза может быть менее 1,0 мкг, что соответствует примерно 100.000 КОЕ/г продукта. Наиболее распространенными симптомами заболевания являются тошнота, рвота, отвращение к пищи, спазмы в животе и диарея. Период реабилитации занимает, как правило, 1-3 дня, но в тяжелых случаях полное восстановление может занять больше времени. Болезнь не передается окружающим, больным необходимо принимать большое количества жидкости.


Патогенность, масштабы заболевания

Коагулозоположитепльные стафилококки - это грамположительные каталазоположительные микроорганизмы, которые образуют типичные колонии на селективно-диагностической питательной среде, дающие положительную реакцию на коагулазу (S. аureus; S. aureus spp. anaerobius) или специфическую для кроличьей плазмы реакцию на агаре с кроличьей плазмой и фибриногеном при определении стандартным методом. Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) - это коагулозоположительные стафилококки, образующие ацетоин и ферментирующие мальтозу в аэробных условиях в процессе определения этих биохимических тестов стандартным методом.

Согласно недавним исследованиям в развитых странах из всех известных инфекций чаще всего к смерти приводит одна из самых известных, «обыкновенных» бактерий - Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк; все штаммы стафилококков, продуцирующие коагулазу, называют золотистыми ). Этот условно-патогенный микроорганизм выделяют у 15-30% здоровых людей, причем носительство у большинства из них ограничено несколькими месяцами. При дефиците иммунитета у больного возбудитель является причиной многочисленных, опасных для жизни зооантропонозных инфекций. Самая распространенная токсическая стафилококковая болезнь - это пищевое отравление. Многие штаммы золотистого стафилококка продуцируют энтеротоксин. Этот яд вызывает диарею, рвоту, боли и спазмы в животе. Согласно проведенного в Новой Зеландии исследования 8,6% детей, госпитализированных с сепсисом, вызванным Staphylococcus aureus, умирают. Дерматовенерологи многих стран обеспокоены увеличением количества стафилококковых инфекций и смертельных случаев из-за стафилококка. Бактерии вызывают порчу пищевых продуктов, включая и так называемые «непортящиеся» продукты. Размножаясь, например, в твердом сыре и салями, бактерии выделяют токсины. Именно они являются наиболее частой причиной серьезных пищевых отравлений. При кулинарной обработке стафилококк гибнет, но его термостабильные токсины не разрушаются. Стафилококки являются причиной множества болезней человека, включая сердечные (эндокардит и перикардит), опорно-двигательного аппарата (остеомиелит и инфекционный артрит). На коже и в мягких тканях стафилококк вызывает так называемый синдром шелушащейся кожи и целлюлиты , являющиеся наиболее частыми инфекционными болезнями кожи. По данным ВОЗ золотистый стафилококк возглавляет список бактерий, которыми наиболее часто заражаются в медицинских учреждениях. Высок риск инфицирования стафилококком при использовании внутривенных катетеров и других медицинских устройств, контактирующих с внутренней средой организма. Фактором риска является и искусственная вентиляция легких. Инфицирование стафилококком может также происходить при нарушении обычных правил гигиены в больницах. Всего на S. аureus приходится около 30% всех «госпитальных инфекций». Стафилококки, выжившие в условиях постоянного применения дезинфицирующих средств и использования антибиотиков - серьезнейший фактор риска для персонала, основа госпитальной инфекции.


Таксономия

Стафилококки - род шаровидных неподвижных аспорогенных грамположительных хемоорганотрофных факультативно-анаэробных или аэробных бактерий из семейства Micrococcaceae. В роду Staphylococcus выделяют около 30 видов, при этом 14 обнаружены на коже и слизистой человека, включая S. aureus , S. epidermidis, S. saprophyticus . Для видовой идентификации используют, в основном, 3 теста: продукцию плазмокоагулазы, анаэробную ферментацию маннита и глюкозы. Антигенная структура бактерии сложная, видоспецифичными антигенами являются тейховые кислоты.

Морфология бактерий и колоний

Бактериальные клетки диаметром 0,5-1,5 мкм делятся в нескольких плоскостях несимметрично, образуя скопления, напоминающие гроздья винограда. Встречаются одиночные клетки, пары и тетрады. Клеточная стенка содержит пептидогликан и глицеринтейховую кислоту. Стафилококки формируют гладкие колонии, окрашенные каротиноидами в желтый или оранжевый цвета. Однако пигментирование не является видовым признаком. При росте на желточно-солевом агаре образуются мутные круглые ровные колонии кремового, желтого или оранжевого цвета. При культивировании в жидких средах бактерии вызывают их равномерное помутнение, а затем образование рыхлого осадка, превращающегося в тягучую массу.


Физиолого-биохимическая характеристика

Стафилококки - факультативные анаэробы, но быстро и обильно растут при наличии кислорода. Хемоорганотрофы с окислительным и ферментатиывным метболизмом. Биохимичесчки очень активны. Продуцируют каталазу, на среде с глюкозой в анаэробных условиях большинство штаммов образуют ацетоин (положительная реакция Фогеса-Проскауэра). Выделяют аммиак при росте на аргениновом бульоне, восстанавливают нитраты до нитритов или молекулярного азота, активно гидролизуют белки, в аэробных условиях расщепляют многие углеводы до уксусной кислоты и углекислого газа. Родовым признаком является ферментация глюкозы в анаэробных условиях, что отличает стафилококки от микрокков. Бактерии растут на основных средах при 37°С (оптимум 35-40°С), но могут расти и в более широком интервале температур (6,5÷46°С). Оптимум роста отмечен при рН 7,0-7,5, но возможен рост в диапазоне рН=4,2÷9,3. Хорошо выдерживают повышенное осмотическое давление, поэтому элективным субстратом для них служат среды с высокой концентрацией хлорида натрия - желточно-солевой или молочно-солевой агар. Стафилококки хорошо переносят высушивание, сохраняя при этом вирулентность; погибают при прямом воздействии солнечного света в течение 10-12 часов. Довольно устойчивы к нагреванию: при 70-80 о С погибают за 20-30 мин, при 150 о С - за 10 мин; сухой жар убивает их за 2 часа. Бактерии устойчивы к действию низких температур, повторное замораживание и оттаивание их не убивает. Менее устойчивы стафилококки к действию дезинфектантов (перекиси водорода и др.), но резистентны к воздействию чистого этанола. При выращивании в аэробных условиях бактерии нуждаются в аминокислотах и витаминах, в анаэробных - требуют дополнительно урацил и дополнительные источники углерода. На кровяном агаре могут образовывать несколько видов гемолизинов - веществ, поражающих эритроциты, лейкоциты и другие клетки. Продуцируют также фибринолизин, фосфатазу, бактериоцины; отдельные штаммы продуцируют коагулазу, ДНК-азу, H 2 S и энтеротоксины (до 10 видов, характеризующихся летальным, гемолитическим или некротическим действием). Ферментируют некоторые углеводы с выделением кислоты без газа. Устойчивы к лизоциму, чувствительны к различным антибиотикам. Патогенные для человека виды обладают одним из 4 факторов токсичности, таким как: 1) экзотоксин, 2) энтеротоксин, 3) лейкоцидин, 4) коагулаза (фермент патогенности). Кросс-резистентность к антибиотикам контролируется R-плазмидой. Другим прокариотамэтот фактор устойчивостипередается трансдукцией.


Источники и факторы передачи инфекции

Стафилококки - условно патогенные микробы. Являются представителями нормальной микрофлоры человека и животных - густо колонизируют различные биотопы организма (кожу, слизистую носа и зева ротовой полости, брюшную полость и подмышечные области). Стафилококки внедряются в организм через кожные покровы и слизистые оболочки воздушно-капельным и воздушно-пылевым путем. Механизм инфицирования обычно связан с переносом возбудителя из участков колонизации на травматизированную поверхность (например, кожные покровы). Существенную роль играют также тесные контакты с носителями и лицами, страдающими стафилококковыми поражениями. Стафилококк устойчив ко многим внешним воздействиям, поэтому обнаруживается во внешней среде - воздухе (пыль), почве, на предметах обихода. Источники и факторы передачи стафилококковой инфекции множественные. Основные источники - больные со стертыми формами стафилококковой инфекции или носители, реже - заболевшие животные, например, (при пищевых стафилококковых отравлениях и энтероколитах) больные маститом коровы. Наибольшую эпидемиологическую опасность представляет медицинский персонал, который может являться носителем госпитальных штаммов стафилококка. Для стафилококковой инфекции характерна множественность механизмов, путей и факторов передачи. Бактерии могут передаваться контактно через нестерильный медицинский инструмент, руки медперсонала, алиментарно с молочными продуктами и кондитерскими изделиями, аэрогенно и парентерально (при инъекциях).

Патогенез

Восприимчивость к стафилококкам очень низкая у лиц с нормальным иммунным статусом и повышенная у иммунокомпромиссных хозяев. Очень часто стафилококковая инфекция развивается на фоне вторичных иммунодефицитов. Факторами патогенности возбудителя является микрокапсула, компоненты клеточной стенки, ферменты агрессии и токсины. Микрокапсула защищает бактерии от фагоцитоза, способствует адгезии микробов и их распространению по тканям. При выращивании in vitro она не образуется. Компоненты клеточной стенки стимулируют развитие воспалительных реакций и нейтрализуют иммуноглобулины, обездвиживают фагоциты. Тейховые кислоты запускают каскад комплимента (компонента иммунологических реакций) по альтернативному пути. Фермент агрессии стафилококков коагулаза существует в трех антигенных формах и вызывает свертывание сыворотки крови. При целом ряде патологических состояний организма стафилококки покидают свои обычные биотопы, преодолевают тканевые барьеры и привносятся кровотоком во внутреннюю стерильную среду организма. Там они вызывают типовую патологическую реакцию - воспаление. Оно проявляется в форме гнойно-воспалительных процессов различной локализации и степени тяжести, вплоть до сепсиса и септикопиемии. Стафилококки являются этиологическим фактором заболеваний, подавляющее большинство которых носят гнойно-воспалительный характер. Бактерии способны поражать практически любые ткани организма. Вызываемые S. aureus инфекции разнообразны и включают более 100 нозологических форм, в числе которых болезни: 1) кожи и подкожной клетчатки (абцессы, панариции, фурункулез и др.), 2) органов дыхания (ангина, плеврит, пневмония и др.), 3) нервной системы и органов чувств (менингит, отит, коньюктивит и др.), 4) органов пищеварения (стоматит, перетонит, энтерит, энтероколит, пищевая интоксикация и др.), 5) костно-мышечной системы и соединительной ткани (артриты, остеомиелит), 6) кровообращения (эндокардит, флебит и др.), 7) мочеполовых органов (цистит, мастит и др.), 8) стафилококковый сепсис . Эти заболевания могут протекать остро или хронически. Пищевые отравления клинически проявляются в форме рвоты и водянистой диареи уже через 2-6 ч после употребления в пищу инфицированных продуктов - кондитерских изделий с кремом, консервов, мясных и овощных салатов и т.д.


Методы обнаружения

На селективных дифференциальных средах вырастают, как правило, только колонии стафилококков. Предположить стафилококковую этиологию заболевания позволяет выделение стафилококка в чистой культуре. Биоматериал для исследования выбирается в зависимости от клинической картины болезни. У штаммов S. aureus, выделенных при пищевой стафилококковой интоксикации, определяют наличие энтеротоксинов в биологических и иммунологических тестах. Традиционными методами предварительные результаты по идентификации стафилококковой инфекции можно получить через 1-2 суток.

Классический метод

Метод обнаружения S. aureus основан на высеве навески продукта и/или разведений его навески в жидкую селективную среду, инкубировании посевов, пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных типичных и/или атипичных колоний к S. aureus.


Страница 38 из 91

ЧАСТНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
ПАТОГЕННЫЕ КОККИ
К патогенным коккам, вызывающим разнообразные по своим клиническим проявлениям заболевания у человека, относятся: 1) стафилококки, 2) стрептококки, 3) пневмококки, 4) менингококки и 5) гонококки.
По тинкториальному признаку (окрашиваемости) их можно разделить на две подгруппы: грамположительные кокки (стафилококки, стрептококки и пневмококки), грамотрицательные кокки (менингококки и гонококки).
Характерной особенностью всех патогенных кокков является способность вызывать гнойные воспалительные процессы, почему их называют также пиогенными (гноеродными) кокками.
Наиболее резко и постоянно гноеродные свойства выражены у стафилококков.
СТАФИЛОКОККИ
Морфология и тинкториальные свойства. Стафилококки- Staphylococcus (впервые выделены Пастером в 1880 г.) имеют форму правильных шаров со средним диаметром 0,8-0,9 мк. В мазке из чистой культуры стафилококки располагаются в виде кучек и скоплений, напоминая гроздь винограда (рис. 60). В гною и другом патологическом материале нередко можно встретить единичных кокков, парных и даже короткие цепочки. Они хорошо красятся основными анилиновыми красками, грамположительны, спор, капсул не образуют, неподвижны.
Культуральные и биохимические свойства. Стафилококки хорошо растут на обычных питательных средах как в присутствии, так и в отсутствии свободного кислорода. Температурный оптимум 37°.

Рис. 60. Стафилококк (а) и стрептококк (б) в чистой культуре.


Рис. 61. Колонии стафилококка на мясопептонном агаре. Ув. 20.

Рис. 62. Посев уколом в желатину.

Отдельные колонии на поверхности агара представляют собой округлые диски средней величины, выпуклые, влажные, непрозрачные, гомогенной или мелкозернистой структуры (см. рис. 01). Цвет колоний зависит от пигмента, который вырабатывают стафилококки и может быть золотистым (Staphylococcus aureus), лимонно-желтым (Staphylococcus citreus) и белым (Staphylococcus albus). При посеве штрихом на скошенный агар образуется обильный рост стафилококка, пигментированный.
Пигменты стафилококка относятся к липохромам, нерастворимы в воде и окрашивают только культуру, но не питательную среду. Образование пигмента идет интенсивно, когда микроорганизмы выращиваются в присутствии кислорода, при комнатной температуре, на свету.
При посеве уколом в желатину на 2-3-й день роста на поверхности среды заметна зона разжижения. По мере разжижения культура падает на дно в виде хлопчатого осадка (рис. 62).
На бульоне стафилококки дают обильный рост. Через 24 часа пребывания в термостате бульон мутнеет, и на дне пробирки образуется осадок.
Стафилококки быстро створаживают молоко, сообщая ему кислую реакцию.
Ферментируют (без газа) лактозу, глюкозу, мальтозу, маннит. Способность расщеплять маннит обычно характеризует патогенные штаммы стафилококка.
Патогенные стафилококки на чашках с кровяным агаром образуют колонии, окруженные зоной гемолиза, и свертывают плазму цитратной крови.
Резистентность. Стафилококк относится к числу весьма стойких микробов. Температура 80° убивает его во влажном состоянии в течение 10 минут. Температуру 70° стафилококки выдерживают до 1 часа. Карболовая кислота (3-5% раствор) убивает их в течение 15- 30 минут. В гною стафилококк сохраняется длительное время.
Токсины, ферменты стафилококков, патогенность их для животных. Патогенные стафилококки продуцируют ряд токсинов и ферментов. Стафилококковый гемолихин растворяет эритроциты. Этот токсин термолабилен (разрушается при 55°), относится к экзотоксинам и при иммунизации им животных можно получить антитоксин. Фильтрат культур стафилококка обладает также некротическим и летальным действием. В настоящее время доказано, что гемолизин, некротоксин и летальный токсин являются составными частями единого стафилококкового экзотоксина. Эти токсины неотделимы друг от друга, и обнаружение одного из них служит доказательством патогенности выделенного стафилококка. Некоторые из гемолитических штаммов золотистого стафилококка вырабатывают энтеротоксин, вызывающий явления острого гастроэнтерита. В фильтратах культур стафилококка часто обнаруживается лейкоцидин - яд, разрушающий лейкоциты. Из ферментов патогенные стафилококки выделяют: 1) плазмокоагул а з у - свертывающую плазму, 2) фибринолизин - растворяющий сгустки фибрина, 3) гиалуронидазу - растворяющую гиалуроновую кислоту, вещество склеивающее элементы соединительной ткани, 4) пенициллиназу - инактивирующую пенициллин и 5) лецитиназу - образует зону помутнения вокруг колоний на желточно-солевом агаре (среда Чистовича).
Из лабораторных животных наиболее чувствительны к стафилококку кролики и в меньшей степени морские свинки и мыши. У кроликов при внутрикожном введении культуры появляется резко выраженный некроз, при подкожном - развиваются абсцессы, а заражение высоковирулентными штаммами стафилококка приводит к сепсису и гибели животных. К стафилококковому энтеротоксину наиболее чувствительны котята-сосунки и молодые мыши.
Классификация стафилококков. Старая классификация стафилококков по выделяемому ими пигменту (золотистый, белый и лимонно-желтый) не дает возможности правильно определить их патогенность. Поэтому в настоящее время считают наиболее верной классификацию стафилококков, предложенную Гроссом. Согласно этой классификации, все стафилококки разделяются на три группы: патогенные, слабопатогенные и непатогенные.
Первая группа - патогенные стафилококки:
а) на чашках с 5% кровяным агаром образуют четкую зону гемолиза;
б) при внутрикожном введении кролику вызывают явления резко выраженного некроза, заканчивающегося иногда смертью животного;
в) продуцируют фермент плазмокоагулазу, вызывающую свертывание плазмы в течение 2 часов;
г) выделяются главным образом от больных сепсисом или острой гнойной инфекцией.
Вторая группа - слабопатогенные стафилококки:
а) на чашках с кровяным агаром образуют зону слабовыраженного неполного гемолиза;
б) при внутрикожном введении кролику вызывают в месте введения покраснение кожи, иногда инфильтрат, чаще без явлений некроза;
в) при посеве в цитратную плазму вызывают свертывание в течение 6 часов и позже;
г) выделяются с поверхности кожи при фолликулите, со слизистых оболочек при катаре верхних дыхательных путей, с поверхности ран, но не из глубины их.
Третья группа - непатогенные стафилококки:
а) на чашках с кровяным агаром гемолиз не обнаруживается;
б) при внутрикожном введении кролику явления некроза и инфильтрата не отмечаются, в отдельных случаях появляется покраснение кожи;
в) реакция плазмокоагуляции отрицательная;
г) обнаруживаются постоянно на здоровой коже, на слизистых оболочках зева, носа и в воздухе.
Патогенез и заболевания у человека. Стафилококки являются очень распространенными микробами. Их находят в воздухе, воде и почве, у человека - почти постоянно на коже и слизистых оболочках. Этим объясняется тот факт, что стафилококк является наиболее частым возбудителем всевозможных нагноений. Повреждение кожи и слизистых оболочек или понижение их резистентности открывает «ворота» для стафилококковой инфекции.
Чаще всего поражается кожа. Стафилококки являются возбудителями фурункулов - гнойного воспаления волосяных мешочков. Если фурункулы приобретают множественный характер, заболевание называется фурункулезом. Когда несколько фурункулов сливаются вместе, образуя более обширный гнойный инфильтрат, возникает карбункул.
Стафилококки встречаются при абсцессах (гнойниках), в гноящихся ранах, при катарах слизистых оболочек, септицемии и септикопиемии (сепсис с образованием гнойных очагов во внутренних органах). Энтеротоксические штаммы золотистого стафилококка могут вызывать пищевые отравления. Последние наблюдаются в результате употребления зараженного стафилококком молока и других молочных продуктов, пирожных с кремом и т. д., так как в этих продуктах стафилококк находит оптимальные условия для своего размножения. В молоко патогенные стафилококки могут попасть или от коров, больных маститом, или с рук доярок, страдающих пиодермией.
Иммунитет. Врожденного иммунитета к стафилококку у людей не существует. Однако человек обладает значительной устойчивостью к этому микроорганизму, что объясняется защитной ролью кожи и наличием в крови антител.
По-видимому, может иметь место приобретенный иммунитет, о чем свидетельствует повышение титра антител у больных и переболевших. Однако этот иммунитет нестоек. Более того, отмечено, что у многих людей, перенесших фурункулез, возникает повышенная восприимчивость к стафилококку.
Сопротивляемость к стафилококку может ослабляться вследствие разных причин - диабета, травмы, истощающих заболеваний и т. д.
Микробиологическая диагностика. Исследование гноя. Чаще всего материалом для микробиологического исследования служит гной. Для этой цели при открытых поражениях после предварительного очищения раневой поверхности стерильным ватным тампоном достают отделяемое из более глубоких частей раны. При закрытых процессах (фурункул, абсцесс) с этой же целью после дезинфекции кожи производится пункция очага нагноения стерильным шприцем. Из полученного гноя делают мазки, окрашивают синью и по Граму и микроскопируют.
По расположению кокков и тинкториальным свойствам трудно дифференцировать стафилококки и стрептококки, поэтому переходят к бактериологическому исследованию, т. е. к посеву гноя на чашки с простым, кровяным агаром, на желточно-солевой агар (см. раздел «Санитарная микробиология» стр. 454) и на среду обогащения (сахарный бульон). Засеянные чашки, перевернув вверх дном, и бульон ставят в термостат при 37° на 1-2 суток.
На чашках с кровяным агаром колонии образуют зоны гемолиза, диаметр которых часто в несколько раз превышает диаметр колонии. Эти прозрачные бесцветные зоны гемолиза образовались вследствие растворения эритроцитов, вызванного гемотоксином стафилококка. На чашках с желточно-солевым агаром патогенные стафилококки вырастают с образованием золотистого пигмента и зоной помутнения - в виде радужного венчика вокруг колонии. С одной из колоний готовят препарат, окрашивают по Граму и микроскопируют. Обнаружение в препарате грамположительных кокков, расположенных в виде гроздей винограда, дает право выдать ориентировочный положительный результат. Затем остаток колонии пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры. Необходимо дифференцировать патогенный стафилококк от непатогенного, т. е. изучить рост на кровяном агаре, желточно-солевом агаре, посеять в нитратную плазму и определить токсигенность на животных.
Проба на плазмокоагуляцию. Для реакции плазмокоагуляции Г. В. Выгодчиков рекомендует следующую методику. У кролика берут 10 мл крови из сердца, помещают в пробирку с 1 мл 5% раствора лимоннокислого натрия. Кровь центрифугируют и отсасывают плазму. Полученную плазму перед опытом разводят физиологическим раствором 1:4 и разливают в стерильные пробирки по 0,5 мл. Колонии стафилококков засевают петлей в пробирки с нитратной кроличьей плазмой, ставят в термостат при 37° и проверяют свертывание плазмы каждые 2-3 часа. Патогенные стафилококки коагулируют плазму в течение 2-10 часов чаще всего в течение 4 часов.
Проба на токсигенность. Токсигенность стафилококковых культур определяется опытом на кроликах, а энтеротоксин - на котятах-сосунках. Из туры стафилококка на скошенном агаре приготовляют взвесь микробов в физиологическом растворе и устанавливают по оптическому стандарту с расчетом 2 млрд. микробных тел в 1 мл взвеси. На боку или спине у кролика выщипывают шерсть и внутрикожно вводят животному по 0,2 мл микробной взвеси. При положительной реакции на месте инъекции образуется инфильтрат, а затем и некроз.
Для обнаружения летального токсина кролику внутривенно вводят фильтрат бульонной культуры стафилококка из расчета 0,75 мл на 1 кг веса. Смерть животного наступает через 15 минут.
Для определения энтеротоксина котят 1,5-2-месячною возраста (весом 400 г) вскармливают исходным зараженным продуктом или молочной культурой стафилококка. Признаки отравления (понос, иногда рвота) наступают через 30-60 минут. Наблюдение ведут 4- 6 часов, и если за это время у котят не будет никакой реакции, биологическая проба считается отрицательной.
Исследование крови. При подозрении на сепсис у больного из локтевой вены стерильно с помощью шприца берут 10 мл крови и засевают в 100-200 мл сахарного бульона. Посев ставят для обогащения на 24-48 часов в термостат. В положительном случае среда мутнеет, а в мазках из нее обнаруживаются грамположительные кокки, имеющие характерную форму и расположение. Из бульона делают пересев в чашку с кровяным агаром и дальнейшее исследование ведут так, как описано выше. Бульон выдерживают в термостате 10 суток, производя каждые 2 дня высев на 5% кровяной агар.
Исследование других материалов. При исследовании материалов, загрязненных большим количеством посторонних микробов (испражнения, мокрота), рекомендуется применять агар с 7,5% хлорида натрия, к которому добавляют 10% теплого снятого молока (среда Петрович). На таком агаре рост посторонней микрофлоры значительно подавляется.
Фаготипирование. При фаготипировании используют набор типовых стафилококковых фагов, состоящих из 21 фага, разделенных на четыре группы. Каждый типовой фаг способен размножаться только на соответствующем ему штамме стафилококка. Фаготипирование стафилококков имеет особое значение при са-
санитарно-бактериологическом исследовании пищевых продуктов для выявления источника инфекции и установления эпидемических связей.
Специфическая терапия и химиотерапия. Стафилококковая вакцина широко применяется для лечения рецидивирующих и хронических инфекций, например, при фурункулезе. Для профилактики этих заболеваний применяется анатоксин.
При лечении стафилококковых инфекций с успехом используют также химиотерапевтические препараты сульфаниламидного ряда (норсульфазол, сульфодимезин и др.), антибиотики (пенициллин в больших дозах, эритромицин, оксациллин и др.), стафилококковый бактериофаг (при поражениях кожи). При тяжелых стафилококковых сепсисах рекомендуются гипериммунная антистафилококковая плазма и гамма-глобулин, получаемые от доноров, иммунизированных анатоксином.

100 р бонус за первый заказ

Выберите тип работы Дипломная работа Курсовая работа Реферат Магистерская диссертация Отчёт по практике Статья Доклад Рецензия Контрольная работа Монография Решение задач Бизнес-план Ответы на вопросы Творческая работа Эссе Чертёж Сочинения Перевод Презентации Набор текста Другое Повышение уникальности текста Кандидатская диссертация Лабораторная работа Помощь on-line

Узнать цену

Стафилококкозы в стационарах 40-60%

В настоящее время род Staphylococcus уже к семейству Micrococcaceae не относится (с начала 90-х годов). Семейства Micrococcaceae не существует (т.к. генетического родства между его составляющими нет). Объединялись лишь по признаку грамположительных аэробных и факультативно-анаэробных кокков, делящихся в нескольких плоскостях.

Micrococcus - генетически родственник актиномицетов.

Staphylococcus – генетически родственник клостридий.

При исследованиях на фузобактерии, правотеллы, бактероиды (строгие анаэробы) на бескислородной среде если не применять среду с антибиотиками (аминогликозиды), то стафилококки (да и энтеробактерии) забьют всё!!!

Метод истощающего посева


Стафилококки – факультативные анаэробы. Micrococcus – строгие аэробы

Дифференциация – тест с аэробным и анаэробным расщеплением глюкозы. Все Staphylococcus глюкоза+ без газа под вазелиновым маслом. Micrococcus – нет.

Staphylococcus – более 30 видов, с подвидами – 44. Дифференцируются они по 33 тестам.

Граница галотолерантности – среда с 7,5 и более % NaCl.

Micrococcus – на 6,5% ещё растут, а выше – только Staphylococcus. (ЖСА – 10% NaCl). Некоторые виды 15% NaCl.

Молочно-солевой агар –растут микрококки, т.к. там NaCl ниже.

У буржуев – среда Чапмена - маннитолово-солевой агар (1% маннита)– 7,5% NaCl. Маннитол=маннит, как глицерол=глицерин

Целенаправленное выделение Staphylococcus (например при санитарно-бактериологических исследованиях). Зона пожелтения за счёт образования кислоты. Как его альтернатива у нас – ЖСА.

Т.е. если выделяем кокки на среда с ≥ 7,5 NaCl то они всегда глюкозо+, т.к. это Staphylococcus, а Micrococcus не растут

Морфология микрококков чуть отличается от стафилококков – и колонии и клетки крупнее , чем у стафилококков.

У каждого человека на коже 7-10 видов микрококков (а всего около 15 видов), М. luteus – преобладает - крупные желтые колонии на неингибиторных средах(старое название – воздушные сарцины, истинные сарцины в аэробных условиях не растут!!!). Равномерно красятся по Граму. В виде кучек, тетрад, пакетов. Другие – белые, бесцветные и т.п. M.livi – эмалево-белые. M.cristi - красные колонии.

Стафилококк по Граму окрашивается неравномерно (ситцевость окраски). Гроздья – чаще дает S. aureus, а так кучки, тетрады, пакеты и т.п. Стафилококки с жидкой стеды – одиночные, пары, кучки.

На средах без желтка пигмент S. aureus не образуется и колонии бывают серыми.

Каротиноиды в воде не растворяются и среда вокруг колонии никогда не окрашивается у Staphylococcus и Micrococcus.

Ангелина Гесс – в середине 19 века ввела агар в среды

Micrococcus тоже УПМФ – сепсис. In vitro чувствителен ко всему. У животных пенициллин – 5 единиц на инъекцию – на уровне изобретения пенициллина – лечит сепсис. Но in vivo лечить очень трудно. Сепсис у больных с сердечным шунтированием. Если попадают в аппарат искусственного кровообращения.

Planococcus – нас не интересуют – в морской воде и человеку не опасны

Стоматококки – 1 вид. Хорошо растут на КА (на КА вообще вырастает что угодно), но на солевых средах они не растут. Особенного клинического значения не имеют. УПМФ. Очень редко вызывают гингивиты и стоматиты (но чаще эти заболевания вызывают анаэробы и вирусы).

S. aureus subsp. aureus

S. aureus subsp. anaerobius - в аэробных условиях не растет (строгий анаэроб)

Среди стафилококков нет сапрофитов – все условно-патогенные . Более 86 нозологических форм заболеваний.

S. aureus и S.epidermidis – по 45 % всех стафилококкозов. Пищевые отравления - только S. aureus (S.epidermidis – может вызывать лишь у грудных детей). Энтеротоксины продуцируют только S. aureus.

У каждого человека 10-12 видов стафилококков живет на коже.

Передние отделы носа – главный биотоп. Там больше всего на единицу площади.

S. epidermidis также может, наряду с S. aureus вызывать вспышки ВБИ.

У новорожденных: конъюнктивиты S. epidermidis раньше в Москве в 70-х годах; госпитальные пневмонии S. epidermidis сейчас.

Плазмиды передаются со скоростью около 2 часов (2 часа стафилококк побыл на коже другого человека и получил новую плазмиду).

Носительство .

В родовспомогательных учреждениях плановое исследование на стафилококк не проводится (только при вспышках) – 345 приказ. У хирургического профиля – 720 приказ до сих пор (нигде в мире не проводится). Количество стафилококковых инфекций одинаково и у «буржуев» и у нас, независимо от санации.

По тест-системам можно дифференцировать до 12-15 видов стафилококков и несколько видов микрококков.

691 приказ – по роддомам отменен. Новый 345 приказ не имеет бактериологической части, поэтому по бактериологии все до сих пор ориентируются по 691 приказу.

Плановое обследование на носительство стафилококка отменено.

Коагулазоположительных стафилококков сейчас 5 видов.

коагулаза

мальтоза

хлопьеобразование

Гемолиз на КА с кровью человека

Ч/з сутки

Почти 100%

± менее 50%

Ч/з ночь

S. aureus не дает коагулазу очень редко – при первичных посевах от больного с массивной антибиотикотерапией. Поэтому пересеваем на косяк и потом снова ставим плазму. Если нет – это не S. aureus.

Пигмент на средах с повышенным содержанием белка и свет (ЖСА, сывороточная среда с белком)

Среди коагулазоотрицательных стафилококков некоторые тоже могут образовывать пигмент. S промагенес – на любой среде образует желтый пигмент

Ацетоин=ацетилметилкарбинол – реакция VP (Фогес-Проскауэра)

Среда Гиса с глюкозой полужидкая. При посеве с солевой среды всегда глюкозоположительны, по крайней мере, в верхней части столбика.

Окончательный отрицательный ответ по полужидкой среде Гиса с глюкозой выдаётся только на 5-е сутки.

Если газ – предполагаем, что микст или вообще не стафилококк.

Полужидкая среда с маннитом исключена в 1974 году – окончательный отрицательный ответ только на 5-е сутки. Ставится только на чашке – ответ наутро.

Плотная среда с глицерином (1%) (может заменяться любым сахаром и спиртом). Жидкие и полужидкие среды для дифференциации внутри родов Staphylococcus и Micrococcus не используются никогда. Индикатор –бромтимолсиний, рН – нейтральный; или бромкрезолкрасный, бромтимолкрасный. Сеем бляшками – до 10 культур на чашку. Радиальной полосой – до 6 культур на чашку. Вокруг стафилококка – пожелтение. Микрококки глицерин не утилизируют.


S. aurecularis на тест-системах он на 95-99% даёт аналогичность S. aureus и только по реакции плазмокоагуляции его можно отличить.

Коагулазоотрицательные стафилококки

При определённых условиях могут давать пигмент.

У стафилококков по 1-2 тестам дифференциацию до вида провести невозможно.

Растет в плазме в виде хлопьев Маннит+ всего 6-7 видов.

коагулаза

Щелочная фосфатаза

трегалоза

Более 20% штаммов

5-10% штаммов

95-100% штаммов

5% штаммов

S. saprophiticus

5% штаммов

У 100% S. aureus гемолитическая активность.

S. saprophiticus встречается очень редко. Циститы и уретриты у женщин молодого возраста – чувствителен к антибиотикам и химиопрепаратам

Коагулазонегативные не могут стать коагулазоположительными.

S. epidermidis никогда не бывает коагулазоположительным, что бы не было написано в 720 приказе

Неспоровая клетка может прожить 10-12 дней.

Щелочная фосфатаза характерна только для S. epidermidis.

Щелочная фосфатаза – паранитрофенолфосфат или фенолфталеинфосфат из тестов на ЩФ в биохимии– 50 мг на 100 мл агара до 20 штаммов на чашку.

Паранитрофенолфосфат → паранитрофенол (желтый) и окраска среды в лимонно-желтый цвет.

Фенолфталеинфосфат → фенолфталеин (бесцветный). Защелачиваем 3-10% р-ром аммиака (капаем на крышку чашки) Колонии малиновые.

Можно купить 10% р-р фенолфталеинфосфата. Хранится в холодильнике годами. 0,5 мл р-ра на 100 мл агара.

S. epidermidis природно чувствительны к новобиоцину.

Лецитовителаза (желточный фактор) – в международной классификации не используется, только у нас.

20-25% S. epidermidis лецитиназопозитивные.

На 80% S. aureus – человеческого происхождения – дают лецитовителазу. Лецитиназонегативные S. aureus – от животных.

Другие стафилококки тоже могут давать. Т. е. Если лецитовителаза+, то это на 80% S. aureus, на 20% другие стафилококки.

Чашки ЖСА на просвет – зона просветления (протеаза) – нам она не важна.

Помутнение – преобладают липазы – также не важны.

Буржуйские кровяные среды – из эритроцитов барана. Считалось, что человеческие штаммы S. aureus продуцируют только α-гемотоксин, но сейчас есть и β-гемотоксин. Это можно разобрать только на эритроцитах барана.

β-гемотоксин даёт зону неполного гемолиза через сутки, а если затем поставить до конца рабочего дня в холодильник – то зона полностью просветлеет.

S. aureus продуцирует 2 фермента

1) термолабильная ДНКаза (нуклеаза) – она есть у всех стафилококков и у большинства других микробов.

2) Термостабильная ДНКаза (нуклеаза) – есть только у S. aureus. Не разрушеется при кипячении и даже кратковременном автоклавировании.

И по нашим приказам определяется только термолабильная ДНКаза (смысла нет).

В прогретой пище (при скрытии факта ПТИ) стафилококк разрушается, а токсины остаются. По наличию термостабильной ДНКазы можно определить, был ли S. aureus.

По приказам высокополимеризированную ДНК 1-2 мг на 1 мл среды (рН=8,0). Посев на чашку бляшками (или уколом). 24 часа. Проявляем, заливая чашку 3N HCl, образуется преципитат ДНК с HCl и где ДНКаза сработала – видим зону просветления. У S. aureus радиус её 10-12 мм, у S. epidermidis её радиус 4-5 мм. Вокруг лунки с убитой культурой S. aureus – 7-8 мм.

S. epidermidis образует только термолабильную ДНКазу, S. aureus – обе ДНКазы – зона больше.

Оглавление темы "Грамположительные кокки. Стафилококки.":









Микробиологическая диагностика золотистого стафилококка. Микроскопия золотистого стафилококка. Выделение золотистого стафилококка. Коагулазный тест.

Микроскопия золотистого стафилококка . Выявление скоплений грамположительных кокков и полиморфно-нуклеар-ных лейкоцитов при исследовании окрашенных мазков клинического материала может служить основанием для предварительного диагноза. Следует помнить, что результаты микроскопии нельзя считать достаточными для выдачи окончательного заключения.

Выделение золотистого стафилококка

Посев золотистого стафилококка проводят на простые питательные среды, обычно на тио-гликолевую среду и КА. Если существует риск контаминации образца, применяют дифференциально-диагностические среды. Наиболее часто используют молочно-солевой (или молочно-жел-точно-солевой) агар и солевой агар с маннитом, на них рост контаминирующей микрофлоры угнетает высокая концентрация NaCl. Кроме того, на молочно-солевом агаре (МСА) хорошо проявляется способность к пигментообразованию и разложению лецитина (лецитовителазная активность). В последнее время широкое распространение в качестве дифференциально-диагностической среды нашёл агар с колистином и налидиксовой кислотой.

Через 18-24 ч золотистый стафилококк (S. aureus ) образует гладкие выпуклые мутные колонии диаметром около 4 мм. Бактерии синтезируют жёлтый пигмент, цвет колоний варьирует от белого до оранжевого. На КА колонии S. aureus окружены зоной полного гемолиза (рис. 1, см. цветную вклейку).

Стафилококки хорошо растут на бульоне, сначала вызывая его равномерное помутнение, а затем образуя рыхлый хлопьевидный осадок. Они дают весьма характерный рост в желатине; через 24-28 ч (наряду с обильным ростом по ходу укола микробиологической иглы) наблюдают начальное разжижение среды, а на 4-5-е сутки образуется открытая вниз воронка, заполненная разжиженной средой.

Для внутривидовой дифференцировки золотистого стафилококка (S. aureus ) применяют коагулазный тест (на наличие свёртывающего фактора), положительный у 95% изолятов (рис. 12-3). Существует ещё несколько дифференцирующих признаков.

Способность ферментировать маннит в анаэробных условиях.
Лецитовителазная активность - образование перламутрового преципитата-«венчика», окружающего колонии, выросшие на средах с добавлением яичного желтка. Преципитат состоит из фосфорилхолина, образующегося из лецитина яичного желтка под действием фермента.
Способность синтезировать термостабильную ДНКазу.
Способность агглютинировать сенсибилизированные эритроциты барана (последний тест позволяет выявить белок А, свёртывающий фактор либо оба продукта).

Для экспресс-идентификации золотистого стафилококка (S. aureus ) применяют тест латекс-агглютинации с использованием коммерческих наборов частиц латекса, нагруженных AT, например «Staphylatex» (American Microscan).