1. Stafylokokken, hun eigenschappen. Classificatie, pathogeniteitsfactoren van stafylokokken. Ziekten veroorzaakt door stafylokokken. Epidemiologie en kenmerken van ziekenhuisstammen van stafylokokken. Laboratoriumdiagnostiek, specifieke preventie en therapie .

De beroemdste:

    Staphylococcus aureus is het meest pathogeen voor de mens. Genoemd vanwege zijn vermogen om een ​​gouden pigment te vormen. Het kan bij mensen in bijna alle organen en weefsels etterende ontstekingsprocessen veroorzaken.

    Staphylococcus epidermidis - vaak aangetroffen op de menselijke huid en slijmvliezen, kan sepsis, endocarditis, conjunctivitis, etterende wondinfectie en etterende urineweginfecties veroorzaken.

    Saprofytische stafylokokken (Staphylococcus saprophyticus) - kan acute blaasontsteking en urethritis veroorzaken.

Taxonomie: behoren tot de afdeling Firmicutes, familie Micrococcacae, geslacht Staphylococcus. Dit geslacht omvat 3 soorten: S.aureus, S.epidermidis en S.saprophyticus.

Morfologische eigenschappen: Alle soorten stafylokokken zijn ronde cellen. De uitstrijkjes zijn gerangschikt in asymmetrische clusters. De celwand bevat een grote hoeveelheid peptidoglycaan, de daarmee geassocieerde teichoïnezuren en proteïne A. Ze zijn Gram-positief. Ze vormen geen sporen en hebben geen flagella. Bij sommige soorten kan een capsule worden aangetroffen. Kan L-vormen vormen.

Culturele eigenschappen: Stafylokokken zijn facultatieve anaëroben. Groeit goed op eenvoudige media. Op dichte media vormen ze gladde, convexe kolonies met verschillende pigmenten die geen taxonomische betekenis hebben. Kan groeien op agar met een hoog NaCl-gehalte. Ze hebben saccharolytisch

kimi en proteolytische enzymen. Stafylokokken kunnen hemolysinen, fibrinolysine, fosfatase, lactamase, bacteriocines, enterotoxinen en coagulase produceren.

Stafylokokken zijn flexibel en worden snel resistent tegen antibacteriële geneesmiddelen. Een belangrijke rol hierin wordt gespeeld door plasmiden, overgedragen met behulp van het transduceren van fagen van de ene cel naar de andere. R-plasmiden bepalen de resistentie tegen één of meer antibiotica door de productie van β-lactamase.

Antigene structuur. Ongeveer 30 antigenen, dit zijn eiwitten, polysachariden en teichoïnezuren. Inbegrepen celwand Staphylococcus bevat proteïne A, dat stevig kan binden aan het Fc-fragment van het immunoglobulinemolecuul, terwijl het Fab-fragment vrij blijft en kan binden aan een specifiek antigeen. Gevoeligheid voor bacteriofagen (fagotype) is te wijten aan oppervlaktereceptoren. Veel stammen van stafylokokken zijn lysogeen (de vorming van sommige toxines vindt plaats met de deelname van een profaag).

Pathogeniteitsfactoren: Voorwaardelijk pathogeen. De microcapsule beschermt tegen fagocytose en bevordert de microbiële adhesie; celwandcomponenten – stimuleren de ontwikkeling van ontstekingsprocessen. Agressie-enzymen: catalase – beschermt bacteriën tegen de werking van fagocyten, β-lactamase – vernietigt antibioticamoleculen.

Weerstand. Resistentie in de omgeving en gevoeligheid voor desinfectiemiddelen komen vaak voor.

Pathogenese. De bron van stafylokokkeninfectie zijn mensen en sommige diersoorten (patiënten of dragers). Overdrachtsmechanismen: ademhaling, contact met huishoudens, voeding.

Immuniteit: P ostinfectieus – cellulair-humoraal, onstabiel, ongeladen.

Kliniek. Ongeveer 120 klinische manifestaties, die lokaal, systemisch of gegeneraliseerd zijn. Deze omvatten etterende ontstekingsziekten van de huid en zachte weefsels (steenpuisten, abcessen), schade aan de ogen, het oor, de nasopharynx, het urogenitale kanaal en het spijsverteringsstelsel (intoxicatie).

Microbiologische diagnostiek . Materiaal voor onderzoek - pus, bloed, urine, sputum, ontlasting.

Bacterioscopische methode: Er worden uitstrijkjes gemaakt van het testmateriaal (behalve bloed) en gekleurd met Gram. De aanwezigheid van gram “+” clustervormige kokken, gelegen in de vorm van clusters.

Bacteriologische methode: Het materiaal wordt in een lus geënt op bloed- en dooier-zout-agarplaten om geïsoleerde kolonies te verkrijgen. De gewassen worden gedurende 24 uur bij 37°C geïncubeerd. De volgende dag worden de volwassen kolonies op beide media onderzocht. De aan- of afwezigheid van hemolyse wordt genoteerd op bloedagar. Op FSA vormt S. aureus gouden, ronde, convexe, ondoorzichtige kolonies. Rond kolonies stafylokokken met lecithinase-activiteit worden troebelingszones met een parelmoerachtige tint gevormd. Om het type stafylokokken definitief vast te stellen, worden 2-3 kolonies overgekweekt in reageerbuizen met voedingsagar-hoeken om zuivere culturen te verkrijgen, gevolgd door bepaling van hun differentiële kenmerken. S.aureus – “+”: vorming van plasmacoagulase, leticinase. Fermentatie: glk, minnita, vorming van a-toxine.

Om de bron van een ziekenhuisinfectie vast te stellen, worden zuivere culturen van stafylokokken geïsoleerd uit patiënten en bacteriedragers, waarna ze worden getypeerd met behulp van een set standaard stafylofagen. Fagen worden verdund tot de titer aangegeven op het etiket. Elk van de bestudeerde culturen wordt geënt op voedingsagar in een petrischaaltje met een gazon, gedroogd en vervolgens wordt een druppel van de overeenkomstige faag in een lus op vierkanten aangebracht (afhankelijk van het aantal fagen in de set), vooraf gemarkeerd met een potlood op de bodem van de petrischaal. De gewassen worden bij 37 °C geïncubeerd. De resultaten worden de volgende dag beoordeeld op de aanwezigheid van kweeklyse.

Serologische methode: bij chronische infectie wordt de titer van anti-a-toxine in het bloedserum van patiënten bepaald. De antilichaamtiter tegen riboteichoïnezuur (celwandcomponent) wordt bepaald.

Behandeling en preventie. Breedspectrumantibiotica (bèta-lactamase-resistente penicillines). In gevallen van ernstige stafylokokkeninfecties die niet met antibiotica kunnen worden behandeld, kan antitoxisch antistafylokokkenplasma of immunoglobuline geïmmuniseerd met geadsorbeerd stafylokokkentoxoïd worden gebruikt. Identificatie en behandeling van patiënten; het uitvoeren van een routineonderzoek van medisch personeel, vaccinatie met stafylokokkentoxoïde. Stafylokokkentoxoïde: verkregen uit het natieve toxoïde door precipitatie met trichloorazijnzuur en adsorptie aan aluminiumoxidehydraat.

Stafylokokkenvaccin: een suspensie van coagulase-positieve stafylokokken die door hitte worden geïnactiveerd. Gebruikt om langdurige ziekten te behandelen.

Humaan antistafylokokken-immunoglobuline : gammaglobulinefractie van bloedserum, bevat stafylokokkentoxoïde. Bereid uit mens bloed, met een hoog gehalte aan antilichamen. Gebruikt voor specifieke behandeling.

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus- facultatieve anaërobe grampositieve kokken, niet-beweeglijk, catalase- en coagulase-positief. Sommige stammen S. aureus produceren stafylokokken-enterotoxinen (SE's), die voedselvergiftiging veroorzaken. Stafylokokken zijn aanwezig in de lucht, stof, afvalwater, water, melk, voedsel, maar ook op voedselproductieapparatuur, op verschillende oppervlakken in de omgeving, op de huid van mensen en dieren. Mensen en dieren vormen het belangrijkste reservoir van infecties. Stafylokokken zijn aanwezig in de neus- en keelholte, maar ook op het haar en de huid van minstens 50% van de gezonde mensen. Staphylococcus aureus kan groeien in een breed temperatuurbereik van 7 tot 48,5°C (optimaal 30 - 37°C); pH 4,2 - 9,3 (optimale pH 7,0-7,5) en bij een hoge concentratie natriumchloride (tot 15% NaCl). Dankzij deze eigenschappen kunnen bacteriën een grote verscheidenheid aan voedingsmiddelen koloniseren. De voedingsmiddelen die het vaakst voedselvergiftiging door stafylokokken veroorzaken zijn vlees en vleesproducten, gevogelte, eieren, salades (met eieren, tonijn, kip, aardappelen, pasta), zoetwaren (bijvoorbeeld slagroomtaarten, chocolade-eclairs), broodbeleg, melk en zuivelproducten. Producten die tijdens het bereidingsproces gedurende een aanzienlijke tijd handmatig worden verwerkt en vervolgens warm worden bewaard, kunnen dus een echte bron van voedselvergiftiging door stafylokokken zijn.

Intoxicatie als gevolg van stafylokokkeninfectie

De oorzaak van de ziekte wordt geproduceerd Staphylococcus aureus toxines, dus de ziekte wordt gekenmerkt door een zeer korte incubatieperiode - meestal van 0,5 tot 6 uur. De gevoeligheid van een patiënt voor toxines wordt bepaald door de toestand van de patiënt, de concentratie van het toxine en de hoeveelheid besmet voedsel dat wordt gegeten. De infectieuze dosis kan minder dan 1,0 μg bedragen, wat overeenkomt met ongeveer 100.000 CFU/g product. De meest voorkomende symptomen van de ziekte zijn misselijkheid, braken, voedselaversie, buikkrampen en diarree. De revalidatieperiode duurt gewoonlijk 1-3 dagen, maar in ernstige gevallen kan volledig herstel langer duren. De ziekte wordt niet overgedragen op anderen; patiënten moeten het nemen grote hoeveelheden vloeistoffen.


Pathogeniteit, omvang van de ziekte

Coagulose-positieve stafylokokken zijn grampositieve catalase-positieve micro-organismen die typische kolonies vormen op een selectief diagnostisch voedingsmedium, waardoor een positieve reactie ontstaat op coagulase (S. aureus; S. aureus spp. anaerobius) of een reactie specifiek op konijnenplasma op agar. met konijnenplasma en fibrinogeen bij bepaling volgens de standaardmethode. Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) is een coagulose-positieve stafylokokken die vormen acetoïne en het fermenteren van maltose onder aerobe omstandigheden tijdens de bepaling van deze biochemische tests met behulp van een standaardmethode.

Volgens recente onderzoeken in ontwikkelde landen van alle bekende infecties leidt één van de bekendste, ‘gewone’ bacteriën het vaakst tot de dood - Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus; alle stammen van stafylokokken die coagulase produceren worden genoemd gouden). Dit opportunistische micro-organisme wordt geïsoleerd bij 15-30% van de gezonde mensen, en bij de meeste van hen blijft het dragerschap beperkt tot enkele maanden. Wanneer de patiënt een tekort aan immuniteit heeft, veroorzaakt de ziekteverwekker talloze levensbedreigende zoönotische infecties. De meest voorkomende toxische stafylokokkenziekte is voedselvergiftiging. Veel stammen van Staphylococcus aureus produceren enterotoxine. Dit gif veroorzaakt diarree, braken, pijn en buikkrampen. Volgens een Nieuw-Zeelandse studie stierf 8,6% van de kinderen die in het ziekenhuis waren opgenomen met sepsis veroorzaakt door Staphylococcus aureus. Dermatovenerologen in veel landen maken zich zorgen over de toename van het aantal stafylokokkeninfecties en sterfgevallen als gevolg van stafylokokken. Bacteriën veroorzaken voedselbederf, inclusief zogenaamde ‘niet-bederfelijke’ voedingsmiddelen. Wanneer bacteriën zich vermenigvuldigen, bijvoorbeeld in harde kaas en salami, produceren ze gifstoffen. Ze zijn de meest voorkomende oorzaak van ernstige voedselvergiftiging. Tijdens het koken sterft stafylokokken, maar de hittebestendige gifstoffen worden niet vernietigd. Stafylokokken zijn de oorzaak van veel menselijke ziekten, waaronder hartziekten (endocarditis en pericarditis) en aandoeningen van het bewegingsapparaat (osteomyelitis en infectieuze artritis). Op de huid en zachte weefsels veroorzaakt stafylokokken de zogenaamde schilferige huid-syndroom En cellulitis, die het meest voorkomen infectieziekten huid. Volgens de WHO staat Staphylococcus aureus bovenaan de lijst van bacteriën die het vaakst geïnfecteerd zijn in medische instellingen. Er is een hoog risico op een stafylokokkeninfectie bij gebruik van intraveneuze katheters en andere medische hulpmiddelen die in contact komen met interne omgeving lichaam. Kunstmatige ventilatie is ook een risicofactor. Stafylokokkeninfecties kunnen ook optreden als de normale ziekenhuishygiënepraktijken niet worden gevolgd. In totaal is S. aureus verantwoordelijk voor ongeveer 30% van alle ‘ziekenhuisinfecties’. Stafylokokken die overleven onder omstandigheden van voortdurend gebruik van ontsmettingsmiddelen en het gebruik van antibiotica vormen een ernstige risicofactor voor het personeel en liggen aan de basis van ziekenhuisinfecties.


Taxonomie

Stafylokokken zijn een geslacht van bolvormige, niet-beweeglijke, asporogene, grampositieve, chemoorganotrofe, facultatieve anaerobe of aerobe bacteriën uit de familie Micrococcaceae. Er zijn ongeveer 30 soorten in het geslacht Staphylococcus, waarvan er 14 voorkomen op de menselijke huid en slijmvliezen, waaronder S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus. Voor soortidentificatie worden hoofdzakelijk 3 tests gebruikt: productie van plasmacoagulase, anaërobe fermentatie van mannitol en glucose. De antigene structuur van de bacterie is complex; de soortspecifieke antigenen zijn teichoïnezuren.

Morfologie van bacteriën en kolonies

Bacteriële cellen met een diameter van 0,5-1,5 micron delen zich asymmetrisch in verschillende vlakken en vormen clusters die op druiventrossen lijken. Er zijn enkele cellen, paren en tetrads. De celwand bevat peptidoglycaan en glycerinezuur. Stafylokokken vormen gladde kolonies die geel of oranje gekleurd zijn door carotenoïden. Pigmentatie is echter geen soortkenmerk. Wanneer gekweekt op dooier-zout-agar, worden troebele, ronde, gladde kolonies van crème, gele of oranje kleur gevormd. Wanneer ze in vloeibare media worden gekweekt, veroorzaken bacteriën hun uniforme troebelheid en vervolgens de vorming van een los sediment, dat verandert in een stroperige massa.


Fysiologische en biochemische kenmerken

Stafylokokken zijn facultatieve anaëroben, maar groeien snel en overvloedig in aanwezigheid van zuurstof. Chemoorganotrofen met oxidatief en enzymatisch metabolisme. Biochemisch zeer actief. Ze produceren catalase; in een medium met glucose onder anaërobe omstandigheden vormen de meeste stammen acetoïne (positieve Voges-Proskauer-reactie). Ze laten ammoniak vrij bij het kweken op argeninebouillon, reduceren nitraten tot nitrieten of moleculaire stikstof, hydrolyseren eiwitten actief en breken onder aerobe omstandigheden veel koolhydraten af ​​tot azijnzuur en kooldioxide. Het algemene kenmerk is de fermentatie van glucose onder anaerobe omstandigheden, waardoor stafylokokken van microcci worden onderscheiden. Bacteriën groeien op basische media bij 37°C (optimaal 35-40°C), maar kunnen groeien in een breder temperatuurbereik (6,5-46°C). Optimale groei werd waargenomen bij pH 7,0-7,5, maar groei is mogelijk in het bereik van pH=4,2-9,3. Ze zijn goed bestand tegen hoge osmotische druk, dus het keuzesubstraat voor hen is media met een hoge concentratie natriumchloride - dooierzout of melkzoutagar. Stafylokokken verdragen het drogen goed, terwijl ze de virulentie behouden; sterven door directe blootstelling zonlicht binnen 10-12 uur. Zeer hittebestendig: bij 70-80 o C sterven ze in 20-30 minuten, bij 150 o C - in 10 minuten; droge hitte doodt ze binnen 2 uur. Bacteriën zijn resistent tegen actie lage temperaturen Bij herhaaldelijk invriezen en ontdooien gaan ze niet dood. Stafylokokken zijn minder resistent tegen de werking van ontsmettingsmiddelen (waterstofperoxide enz.), maar wel resistent tegen de effecten van pure ethanol. Als bacteriën onder aërobe omstandigheden worden gekweekt, hebben ze aminozuren en vitamines nodig; als ze onder anaërobe omstandigheden worden gekweekt, hebben ze extra uracil en extra koolstofbronnen nodig. Op bloedagar kunnen zich verschillende soorten vormen hemolysinen- stoffen die rode bloedcellen, leukocyten en andere cellen beschadigen. Ze produceren ook fibrinolysine, fosfatase en bacteriocines; individuele stammen produceren coagulase, DNAase, H 2 S en enterotoxinen (tot 10 soorten die worden gekenmerkt door dodelijke, hemolytische of necrotische effecten). Sommige koolhydraten worden gefermenteerd, waarbij zuur vrijkomt zonder gas. Resistent tegen lysozym, gevoelig voor verschillende antibiotica. Soorten die pathogeen zijn voor de mens hebben een van de vier toxiciteitsfactoren, zoals: 1) exotoxine, 2) enterotoxine, 3) leukocidine, 4) coagulase (pathogeniciteitsenzym). Kruisresistentie tegen antibiotica wordt gecontroleerd door het R-plasmide. Deze weerstandsfactor wordt door transductie overgedragen op andere prokaryoten.


Bronnen en factoren van overdracht van infectie

Stafylokokken zijn voorwaardelijk pathogene microben. Ze zijn vertegenwoordigers van de normale microflora van mens en dier - ze koloniseren dicht verschillende biotopen van het lichaam (huid, neusslijmvlies en keelholte, buikholte en okselgebieden). Stafylokokken worden via de huid en slijmvliezen in het lichaam gebracht door druppeltjes in de lucht en stof in de lucht. Het infectiemechanisme wordt meestal geassocieerd met de overdracht van de ziekteverwekker van kolonisatieplaatsen naar een getraumatiseerd oppervlak (bijvoorbeeld de huid). Ook nauwe contacten met dragers en personen die lijden aan stafylokokkenlaesies spelen een belangrijke rol. Stafylokokken zijn resistent tegen veel invloeden van buitenaf en worden daarom aangetroffen in externe omgeving- lucht (stof), grond, op huishoudelijke artikelen. Er zijn meerdere bronnen en factoren voor de overdracht van stafylokokkeninfecties. De belangrijkste bronnen zijn patiënten met uitgewiste vormen van stafylokokkeninfectie of dragers, minder vaak - zieke dieren, bijvoorbeeld (in het geval van en enterocolitis) koeien met mastitis. Het grootste epidemiologische gevaar wordt gevormd door medisch personeel, dat mogelijk drager is van ziekenhuisstammen van stafylokokken. Stafylokokkeninfectie wordt gekenmerkt door een veelheid aan mechanismen, routes en transmissiefactoren. Bacteriën kunnen worden overgedragen contact via een niet-steriel medisch instrument, de handen van medisch personeel, qua voedingswaarde met zuivelproducten en zoetwaren, aerogene en parenteraal(voor injecties).

Pathogenese

De gevoeligheid voor stafylokokken is zeer laag bij personen met een normale immuunstatus en verhoogd bij immuungecompromitteerde gastheren. Heel vaak ontwikkelt een stafylokokkeninfectie zich tegen de achtergrond van secundaire immuundeficiënties. De pathogeniteitsfactoren van de ziekteverwekker zijn de microcapsule, celwandcomponenten, agressie-enzymen en toxines. De microcapsule beschermt bacteriën tegen fagocytose, bevordert de adhesie van microben en hun verspreiding door weefsels. Bij het groeien in vitro het wordt niet gevormd. Celwandcomponenten stimuleren de ontwikkeling van ontstekingsreacties en neutraliseren immunoglobulinen, immobiliseren fagocyten. Teichoïnezuren veroorzaken een cascade compliment(een onderdeel van immunologische reacties) via een alternatieve route. Het stafylokokkenagressie-enzym coagulase bestaat in drie antigene vormen en zorgt ervoor dat bloedserum stolt. Bij een aantal pathologische aandoeningen van het lichaam verlaten stafylokokken hun gebruikelijke biotopen, overwinnen weefselbarrières en worden via de bloedbaan in de interne steriele omgeving van het lichaam geïntroduceerd. Daar veroorzaken ze een typische pathologische reactie: ontsteking. Het manifesteert zich in de vorm van etterende ontstekingsprocessen van verschillende lokalisatie en ernst, tot sepsis en septicopyemie. Stafylokokken zijn de etiologische factor van ziekten, waarvan de overgrote meerderheid purulent-inflammatoir van aard is. Bacteriën kunnen vrijwel elk weefsel van het lichaam infecteren. Infecties veroorzaakt door S. aureus zijn divers en omvatten meer dan 100 nosologische vormen, waaronder ziekten: 1) huid en onderhuids weefsel(abcessen, misdadigers, furunculose, enz.), 2) ademhalingsorganen(angina pectoris, pleuritis, longontsteking, enz.), 3) zenuwstelsel En zintuigen(meningitis, otitis, conjunctivitis, enz.), 4) spijsverteringsorganen(stomatitis, peritonitis, enteritis, enterocolitis, voedselintoxicatie, enz.), 5) bewegingsapparaat En bindweefsel(artritis, osteomyelitis), 6) bloedcirculatie(endocarditis, flebitis, enz.), 7) urogenitale organen(cystitis, mastitis, enz.), 8) stafylokokken-sepsis. Deze ziekten kunnen acuut of chronisch zijn. Voedselvergiftiging Klinisch gemanifesteerd in de vorm van braken en waterige diarree binnen 2-6 uur na het eten van geïnfecteerd voedsel - zoetwaren met room, ingeblikt voedsel, vlees- en groentesalades, enz.


Detectiemethoden

In de regel groeien alleen kolonies stafylokokken op selectieve differentiële media. Isolatie van stafylokokken in zuivere kweek stelt ons in staat de stafylokokkenetiologie van de ziekte aan te nemen. Het biomateriaal voor onderzoek wordt geselecteerd afhankelijk van het ziektebeeld van de ziekte. Bij S. aureus-stammen die zijn geïsoleerd tijdens voedselintoxicatie door stafylokokken, wordt de aanwezigheid van enterotoxinen bepaald in biologische en immunologische tests. Traditionele methoden voorlopige resultaten identificatie van een stafylokokkeninfectie kan binnen 1-2 dagen worden verkregen.

Klassieke methode

De methode voor het detecteren van S. aureus is gebaseerd op het zaaien van een monster van het product en/of verdunningen van het monster in een vloeibaar selectief medium, het incuberen van de gewassen, het opnieuw zaaien van de kweekvloeistof op het oppervlak van een agarselectief diagnostisch medium en het bevestigen door biochemische kenmerken dat de geïsoleerde typische en/of atypische kolonies tot S. aureus behoren.


Pagina 38 van 91

PRIVÉ-MEDISCHE MICROBIOLOGIE
PATHOGENE COCCI
Pathogene kokken die verschillende klinische manifestaties van ziekten bij mensen veroorzaken, zijn onder meer: ​​1) stafylokokken, 2) streptokokken, 3) pneumokokken, 4) meningokokken en 5) gonokokken.
Op basis van hun kleureigenschappen (kleurbaarheid) kunnen ze worden onderverdeeld in twee subgroepen: grampositieve kokken (stafylokokken, streptokokken en pneumokokken), gramnegatieve kokken (meningokokken en gonokokken).
Karakteristieke eigenschap iedereen pathogene kokken is het vermogen om etterende ontstekingsprocessen te veroorzaken, daarom worden ze ook pyogene (pyogene) kokken genoemd.
De pyogene eigenschappen zijn het meest uitgesproken en komen voortdurend tot uiting in stafylokokken.
STAPHYLOCOCCUS
Morfologie en kleureigenschappen. Stafylokokken - Stafylokokken (voor het eerst geïsoleerd door Pasteur in 1880) hebben de vorm van gewone balletjes met een gemiddelde diameter van 0,8-0,9 micron. In een uitstrijkje van een pure cultuur bevinden stafylokokken zich in de vorm van hopen en trossen, die lijken op een druiventros (Fig. 60). In pus en ander pathologisch materiaal kun je vaak afzonderlijke kokken, gepaarde kokken en zelfs korte ketens vinden. Ze schilderen goed met basische anilinekleurstoffen, zijn grampositief, vormen geen sporen of capsules en zijn onbeweeglijk.
Culturele en biochemische eigenschappen. Stafylokokken groeien goed op gewone voedingsmedia, zowel in de aanwezigheid als in de afwezigheid van vrije zuurstof. Temperatuur optimaal 37°.

Rijst. 60. Stafylokokken (a) en streptokokken (b) in zuivere cultuur.


Rijst. 61. Kolonies van stafylokokken op vleespepton-agar. Uv. 20.

Rijst. 62. Zaaien door injectie in gelatine.

Individuele kolonies op het oppervlak van de agar zijn ronde schijven gemiddelde grootte, convexe, vochtige, ondoorzichtige, homogene of fijnkorrelige structuur (zie Fig. 01). De kleur van de kolonies hangt af van het pigment dat stafylokokken produceren en kan goudkleurig zijn (Staphylococcus aureus), citroengeel (Staphylococcus citreus) en wit (Staphylococcus albus). Wanneer het op agarhellingen wordt uitgestreken, wordt een overvloedige groei van gepigmenteerde stafylokokken gevormd.
Staphylococcus-pigmenten zijn lipochromen, onoplosbaar in water en kleuren alleen de cultuur, maar niet het voedingsmedium. Pigmentvorming vindt intensief plaats wanneer micro-organismen worden gekweekt in aanwezigheid van zuurstof, bij kamertemperatuur, in het licht.
Bij het zaaien door injectie in gelatine op de 2-3e groeidag is een vervloeiingszone merkbaar op het oppervlak van het medium. Naarmate de cultuur vloeibaar wordt, valt deze naar de bodem in de vorm van een donzig sediment (Fig. 62).
Stafylokokken groeien overvloedig in bouillon. Na 24 uur in de thermostaat wordt de bouillon troebel en vormt zich een bezinksel op de bodem van de reageerbuis.
Stafylokokken stremmen de melk snel, waardoor er een zure reactie ontstaat.
Fermenteer (zonder gas) lactose, glucose, maltose, mannitol. Het vermogen om mannitol af te breken kenmerkt doorgaans pathogene stammen van stafylokokken.
Pathogene stafylokokken op bloedagarplaten vormen ze kolonies omgeven door een hemolysezone en coaguleren ze gecitreerd bloedplasma.
Weerstand. Stafylokokken zijn een van de zeer persistente microben. Een temperatuur van 80° doodt het binnen 10 minuten als het nat is. Stafylokokken zijn maximaal 1 uur bestand tegen een temperatuur van 70°C. Carbolzuur (3-5% oplossing) doodt ze binnen 15-30 minuten. Stafylokokken blijven lange tijd in de pus aanwezig.
Toxinen, enzymen van stafylokokken, hun pathogeniteit voor dieren. Pathogene stafylokokken produceren een aantal toxines en enzymen. Stafylokokkenhemolyquine lost rode bloedcellen op. Dit toxine is thermolabiel (vernietigd bij 55°C), het wordt geclassificeerd als een exotoxine en door dieren ermee te immuniseren kan een antitoxine worden verkregen. Het filtraat van stafylokokkenculturen heeft ook een necrotisch en dodelijk effect. Het is nu bewezen dat hemolysine, necrotoxine en dodelijke toxine componenten zijn van één enkel exotoxine van stafylokokken. Deze toxines zijn onafscheidelijk van elkaar en de detectie van een ervan dient als bewijs van de pathogeniteit van de geïsoleerde stafylokokken. Sommige hemolytische stammen van Staphylococcus aureus produceren een enterotoxine dat acute gastro-enteritis veroorzaakt. Leukocidine, een gif dat witte bloedcellen vernietigt, wordt vaak aangetroffen in de filtraten van stafylokokkenculturen. Van de enzymen onderscheiden pathogene stafylokokken: 1) plasmacoagulatie az u - stollend plasma, 2) fibrinolysine - het oplossen van fibrinestolsels, 3) hyaluronidase - het oplossen van hyaluronzuur, een stof die bindweefselelementen lijmt, 4) penicillinase - het inactiveren van penicilline en 5) lecithinase - vormingszone van troebelheid rond de koloniën op dooierzoutagar (Chistovich's medium).
Van de proefdieren zijn konijnen het meest gevoelig voor stafylokokken, en in mindere mate cavia's en muizen. Bij konijnen treedt, wanneer de kweek intradermaal wordt toegediend, uitgesproken necrose op, bij subcutane toediening ontwikkelen zich abcessen en infectie met zeer virulente stafylokokkenstammen leidt tot sepsis en de dood van dieren. De meest gevoelige voor stafylokokken-enterotoxine zijn zogende kittens en jonge muizen.
Classificatie van stafylokokken. De oude classificatie van stafylokokken volgens het pigment dat ze afscheiden (goudkleurig, wit en citroengeel) maakt het niet mogelijk om hun pathogeniteit correct te bepalen. Daarom wordt de door Gross voorgestelde classificatie van stafylokokken momenteel als de meest correcte beschouwd. Volgens deze classificatie zijn alle stafylokokken verdeeld in drie groepen: pathogeen, zwak pathogeen en niet-pathogeen.
De eerste groep zijn pathogene stafylokokken:
a) op platen met 5% bloedagar vormen ze een heldere hemolysezone;
b) wanneer ze intradermaal aan een konijn worden toegediend, veroorzaken ze verschijnselen van uitgesproken necrose, soms eindigend in de dood van het dier;
c) het enzym plasmacoagulase produceren, dat binnen 2 uur plasmacoagulatie veroorzaakt;
d) zijn voornamelijk geïsoleerd van patiënten met sepsis of acute purulente infectie.
De tweede groep bestaat uit zwak pathogene stafylokokken:
a) op bloedagarplaten vormen ze een zone van milde onvolledige hemolyse;
b) wanneer het intradermaal aan een konijn wordt toegediend, veroorzaakt het roodheid van de huid op de injectieplaats, soms infiltratie, vaker zonder necrose;
c) wanneer ze worden geïnoculeerd in citraatplasma, veroorzaken ze binnen 6 uur of later coagulatie;
d) komen vrij van het huidoppervlak tijdens folliculitis, van de slijmvliezen tijdens catarre van de bovenste luchtwegen, van het oppervlak van wonden, maar niet van hun diepte.
De derde groep zijn niet-pathogene stafylokokken:
a) er wordt geen hemolyse gedetecteerd op bloedagarplaten;
b) bij intradermale toediening aan een konijn worden de verschijnselen van necrose en infiltratie niet waargenomen, in sommige gevallen treedt roodheid van de huid op;
c) de plasmacoagulatiereactie is negatief;
d) worden voortdurend aangetroffen op een gezonde huid, op de slijmvliezen van de keel, neus en in de lucht.
Pathogenese en ziekten bij de mens. Stafylokokken zijn veel voorkomende microben. Ze worden aangetroffen in de lucht, het water en de bodem, bij mensen - bijna constant op de huid en slijmvliezen. Dit verklaart het feit dat stafylokokken de meest voorkomende veroorzaker is van allerlei soorten ettering. Schade aan de huid en slijmvliezen of een afname van hun weerstand opent de “poort” voor stafylokokkeninfectie.
De huid wordt het vaakst aangetast. Stafylokokken zijn de veroorzakers van steenpuisten - etterende ontsteking van de haarzakjes. Als de steenpuisten meerdere worden, wordt de ziekte furunculose genoemd. Wanneer verschillende steenpuisten samenvloeien en een uitgebreider etterig infiltraat vormen, ontstaat er een karbonkel.
Stafylokokken worden aangetroffen in abcessen (zweren), in etterende wonden, bij catarre van de slijmvliezen, septikemie en septicopyemie (sepsis met de vorming van etterende haarden in de inwendige organen). Enterotoxische stammen van Staphylococcus aureus kunnen voedselvergiftiging veroorzaken. Deze laatste worden waargenomen als gevolg van de consumptie van met stafylokokken besmette melk en andere zuivelproducten, slagroomtaarten, enz., aangezien stafylokokken in deze producten optimale omstandigheden voor hun voortplanting vinden. Pathogene stafylokokken kunnen in de melk terechtkomen, hetzij van koeien met mastitis, hetzij uit de handen van melkmeisjes die aan pyodermie lijden.
Immuniteit. Er bestaat bij mensen geen aangeboren immuniteit tegen stafylokokken. Mensen hebben echter een aanzienlijke weerstand tegen dit micro-organisme, wat wordt verklaard door de beschermende rol van de huid en de aanwezigheid van antilichamen in het bloed.
Blijkbaar kan verworven immuniteit optreden, zoals blijkt uit een toename van de antilichaamtiter bij patiënten en degenen die hersteld zijn van de ziekte. Deze immuniteit is echter kwetsbaar. Bovendien is opgemerkt dat veel mensen die furunculose hebben gehad een verhoogde gevoeligheid voor stafylokokken ervaren.
De weerstand tegen stafylokokken kan om verschillende redenen verzwakt zijn: diabetes, verwondingen, slopende ziekten, enz.
Microbiologische diagnostiek. Onderzoek van pus. Meestal is het materiaal voor microbiologisch onderzoek pus. Voor dit doel wordt, in het geval van open laesies, na voorafgaande reiniging van het wondoppervlak met een steriel wattenstaafje de afscheiding uit de diepere delen van de wond verwijderd. In het geval van gesloten processen (steenpuist, abces), wordt voor hetzelfde doel, na desinfectie van de huid, een punctie van de etteringsbron uitgevoerd met een steriele injectiespuit. Van de resulterende pus worden uitstrijkjes gemaakt, gekleurd met blauw en Gram, en onder een microscoop onderzocht.
Het is moeilijk om stafylokokken en streptokokken te onderscheiden op basis van de locatie van kokken en kleureigenschappen, dus gaan ze over tot bacteriologisch onderzoek, d.w.z. het inenten van pus op platen met eenvoudige bloedagar, op dooierzoutagar (zie sectie "Sanitaire microbiologie" p. 454) en op het verrijkingsmedium (suikerbouillon). De geplaatste kopjes worden ondersteboven gedraaid en de bouillon wordt gedurende 1-2 dagen in een thermostaat op 37°C geplaatst.
Op bloedagarplaten vormen kolonies hemolysezones, waarvan de diameter vaak meerdere malen de diameter van de kolonie is. Deze heldere, kleurloze hemolysezones werden gevormd als gevolg van het oplossen van rode bloedcellen veroorzaakt door stafylokokkenhemotoxine. Op platen met dooierzoutagar groeien pathogene stafylokokken met de vorming van een gouden pigment en een troebele zone - in de vorm van een regenboogkroon rond de kolonie. Uit één van de kolonies wordt een preparaat bereid, gekleurd met Gram en onderzocht onder een microscoop. De detectie van grampositieve kokken in het preparaat, gerangschikt in de vorm van druiventrossen, geeft het recht om een ​​indicatief positief resultaat af te geven. De rest van de kolonie wordt vervolgens overgekweekt op agar-agarplaten om een ​​zuivere cultuur te verkrijgen. Het is noodzakelijk om pathogene stafylokokken te onderscheiden van niet-pathogene, d.w.z. de groei op bloedagar, dooier-zoutagar te bestuderen, het in nitraatplasma te inoculeren en de toxigeniciteit bij dieren te bepalen.
Plasmacoagulatietest. Voor de plasmacoagulatiereactie beveelt G.V. Vygodchikov de volgende techniek aan. Er wordt 10 ml bloed uit het hart van het konijn afgenomen en in een reageerbuisje gedaan met 1 ml 5% natriumcitraatoplossing. Het bloed wordt gecentrifugeerd en het plasma wordt afgezogen. Vóór het experiment wordt het resulterende plasma verdund met fysiologische oplossing 1:4 en in steriele buizen van 0,5 ml gegoten. Kolonies van stafylokokken worden geënt met een lus in buizen met nitraatkonijnenplasma, in een thermostaat op 37° geplaatst en de plasmacoagulatie wordt elke 2-3 uur gecontroleerd. Pathogene stafylokokken coaguleren plasma binnen 2-10 uur, meestal binnen 4 uur.
Toxiciteitstest. De toxigeniciteit van stafylokokkenculturen wordt bepaald door ervaring met konijnen, en het enterotoxine wordt bepaald door ervaring met zogende kittens. Een suspensie van microben in een fysiologische oplossing wordt bereid uit staphylococcus-agar op schuine agar en bepaald volgens een optische standaard met de berekening van 2 miljard microbiële lichamen in 1 ml suspensie. Het haar op de zij of rug van het konijn wordt geplukt en 0,2 ml van een microbiële suspensie wordt intradermaal in het dier geïnjecteerd. Als de reactie positief is, vormt zich een infiltraat op de injectieplaats en vervolgens necrose.
Om het dodelijke toxine te detecteren, wordt het filtraat van de staphylococcus-bouilloncultuur intraveneus in het konijn geïnjecteerd met een snelheid van 0,75 ml per 1 kg gewicht. De dood van het dier vindt plaats binnen 15 minuten.
Om enterotoxine te bepalen, worden kittens van 1,5-2 maanden oud (met een gewicht van 400 g) gevoed met het originele besmette product of een melkcultuur van stafylokokken. Tekenen van vergiftiging (diarree, soms braken) treden binnen 30-60 minuten op. Observatie wordt gedurende 4-6 uur uitgevoerd en als de kittens gedurende deze tijd geen enkele reactie vertonen, wordt de biologische test als negatief beschouwd.
Bloed Test. Als bij een patiënt sepsis wordt vermoed, wordt met een steriele injectiespuit 10 ml bloed uit de cubitale ader afgenomen en geënt in 100-200 ml suikerbouillon. De gewassen worden gedurende 24-48 uur in een thermostaat geplaatst voor verrijking. In een positief geval wordt het medium troebel en worden grampositieve kokken met een karakteristieke vorm en locatie gevonden in uitstrijkjes ervan. De bouillon wordt geënt in een bord met bloedagar en verder onderzoek wordt uitgevoerd zoals hierboven beschreven. De bouillon wordt gedurende 10 dagen in een thermostaat bewaard en elke 2 dagen op 5% bloedagar gezaaid.
Onderzoek naar andere materialen. Bij onderzoek van verontreinigde materialen grote hoeveelheid vreemde microben (uitwerpselen, sputum), wordt het aanbevolen om agar te gebruiken met 7,5% natriumchloride, waaraan 10% warme magere melk wordt toegevoegd (Petrovich medium). Op dergelijke agar wordt de groei van vreemde microflora aanzienlijk onderdrukt.
Fagotypering. Bij fagotypering wordt gebruik gemaakt van een set typische stafylokokkenfagen, bestaande uit 21 fagen, verdeeld in vier groepen. Elke typische faag kan zich alleen vermenigvuldigen met de overeenkomstige stafylokokkenstam. Fagotypering van stafylokokken heeft speciale betekenis met sa-
sanitair en bacteriologisch onderzoek van voedingsproducten om de bron van infectie te identificeren en epidemische verbanden vast te stellen.
Specifieke therapie en chemotherapie. Het stafylokokkenvaccin wordt veel gebruikt voor de behandeling van terugkerende en chronische infecties, zoals furunculose. Om deze ziekten te voorkomen, wordt toxoïde gebruikt.
Bij de behandeling van stafylokokkeninfecties worden ook met succes chemotherapeutica uit de sulfonamidereeks (norsulfazol, sulfodimezin, enz.), antibiotica (penicilline in grote doses, erytromycine, oxacilline, enz.) en stafylokokkenbacteriofaag (voor huidlaesies) gebruikt. Voor ernstige stafylokokkensepsis worden hyperimmuun antistafylokokkenplasma en gammaglobuline, verkregen van donoren die met toxoïd zijn geïmmuniseerd, aanbevolen.

100 RUR bonus voor eerste bestelling

Selecteer het soort werk Diploma scriptie Cursuswerk Samenvatting Masterscriptie Praktijkrapport Artikel Rapport Review Test Monografie Probleemoplossend Businessplan Antwoorden op vragen Creatief werk Essay Tekenen Essays Vertalen Presentaties Typen Andere Het unieke karakter van de tekst vergroten Masterproef Laboratoriumwerk Online hulp

Ontdek de prijs

Stafylokokken in ziekenhuizen 40-60%

Momenteel behoort het geslacht Staphylococcus niet langer tot de familie Micrococcaceae (sinds begin jaren 90). De familie Micrococcaceae bestaat niet (omdat er geen genetische relatie bestaat tussen de componenten). Ze waren alleen verenigd op basis van grampositieve aerobe en facultatieve anaerobe kokken, verdeeld in verschillende vlakken.

Micrococcus is een genetisch familielid van actinomyceten.

Staphylococcus is een genetisch familielid van Clostridia.

Als je bij het bestuderen van Fusobacteriën, Pravotella, Bacteroides (strikte anaeroben) in een zuurstofvrije omgeving, als je geen medium met antibiotica (aminoglycosiden) gebruikt, dan zullen stafylokokken (en enterobacteriën) alles doden!!!

Uitputtende zaaimethode


Stafylokokken zijn facultatieve anaëroben. Micrococcus – strikte aeroben

Differentiatie - test met aerobe en anaerobe afbraak van glucose. Alle Staphylococcus glucose+ zonder gas onder vaselineolie. Microkokken - nee.

Staphylococcus - meer dan 30 soorten, met 44 ondersoorten. Ze worden gedifferentieerd met behulp van 33 tests.

De grens van halotolerantie is een omgeving met 7,5% of meer NaCl.

Micrococcus - groeit nog steeds met 6,5%, en alleen Staphylococcus is hoger. (ZhSA – 10% NaCl). Sommige soorten 15% NaCl.

Melk-zout-agar – microkokken groeien omdat NaCl is daar lager.

De burgerij gebruikt Chapman's medium - mannitol-zoutagar (1% mannitol) - 7,5% NaCl. Mannitol=mannitol, zoals glycerol=glycerol

Gerichte isolatie van Staphylococcus (bijvoorbeeld tijdens sanitaire en bacteriologische onderzoeken). Vergelingszone door zuurvorming. Als alternatief hebben we ZhSA.

Die. als we kokken isoleren in een medium met ≥ 7,5 NaCl, dan zijn het altijd glucose+, omdat dit is Staphylococcus en Micrococcus groeit niet

De morfologie van microkokken verschilt enigszins van die van stafylokokken - zowel kolonies als cellen groter dan die van stafylokokken.

Elke persoon heeft 7-10 soorten microkokken op de huid (en er zijn in totaal ongeveer 15 soorten), M. luteus overheerst - grote gele kolonies op niet-remmende media (de oude naam is luchtsarcina, echte sarcina groeit niet in aërobe omstandigheden!!!). Ze kleuren gelijkmatig volgens Gram. In de vorm van stapels, notitieboekjes, pakjes. Anderen zijn wit, kleurloos, enz. M.livi – emaille-wit. M.cristi - rode kolonies.

Staphylococcus kleurt ongelijkmatig volgens Gram (calicokleuring). Clusters – meestal geproduceerd door S. aureus, maar ook stapels, tetrads, zakken, enz. Stafylokokken met vloeibare stammen - enkelvoudig, paren, groepen.

Op media zonder dooier wordt geen S. aureus-pigment gevormd en zijn de kolonies grijs.

Carotenoïden lossen niet op in water en de omgeving rond de kolonie wordt nooit gekleurd door Staphylococcus en Micrococcus.

Angelina Hess - introduceerde agar halverwege de 19e eeuw in de media

Micrococcus is ook UPMF - sepsis. In vitro gevoelig voor alles. Bij dieren behandelt penicilline - 5 eenheden per injectie - op het niveau van de uitvinding van penicilline - sepsis. Maar in vivo behandeling is erg moeilijk. Sepsis bij patiënten met een cardiale bypass-operatie. Als ze in een hart-longmachine belanden.

Planococcus – wij zijn niet geïnteresseerd – in zeewater en niet gevaarlijk voor de mens

Stomatokokken – 1 soort. Ze groeien goed op KA (alles kan groeien op KA), maar ze groeien niet in zoute media. Ze hebben geen bijzondere klinische betekenis. UPMF. Gingivitis en stomatitis worden zeer zelden veroorzaakt (maar vaker worden deze ziekten veroorzaakt door anaëroben en virussen).

S. aureus subsp. goudkleurig

S. aureus subsp. anaerobius - groeit niet onder aerobe omstandigheden (strikt anaëroob)

Er zijn geen saprofyten onder stafylokokken - allemaal opportunistisch. Meer dan 86 nosologische vormen van ziekten.

S. aureus en S. epidermidis – elk 45% van alle stafylokokken. Voedselvergiftiging - alleen S. aureus (S. epidermidis - kan alleen bij zuigelingen veroorzaken). Enterotoxinen worden alleen geproduceerd door S. aureus.

Elke persoon heeft 10-12 soorten stafylokokken die op de huid leven.

De voorste delen van de neus vormen de belangrijkste biotoop. Er is meer van alles per oppervlakte-eenheid.

S. epidermidis kan, samen met S. aureus, ook uitbraken van nosocomiale infecties veroorzaken.

Bij pasgeborenen: conjunctivitis S. epidermidis eerder in Moskou in de jaren '70; in het ziekenhuis opgelopen longontsteking S. epidermidis nu.

Plasmiden worden overgedragen met een snelheid van ongeveer 2 uur (stafylokokken brachten 2 uur door op de huid van een andere persoon en kregen een nieuw plasmide).

Koets.

In kraamklinieken worden geen routinetests op stafylokokken uitgevoerd (alleen tijdens uitbraken) - bestel 345. Het chirurgische profiel telt nog steeds 720 opdrachten (nergens ter wereld uitgevoerd). Het aantal stafylokokkeninfecties is hetzelfde onder de ‘bourgeoisie’ als onder ons, ongeacht de sanitaire voorzieningen.

Met behulp van testsystemen is het mogelijk om tot 12-15 soorten stafylokokken en verschillende soorten microkokken te onderscheiden.

691 bestellingen voor kraamklinieken werden geannuleerd. De nieuwe 345-beschikking heeft geen bacteriologisch deel, dus in de bacteriologie wordt iedereen nog steeds geleid door bestelling 691.

Het geplande onderzoek naar dragerschap van stafylokokken is afgelast.

Er zijn momenteel 5 soorten coagulase-positieve stafylokokken.

coagulase

maltose

uitvlokking

Hemolyse op KA met menselijk bloed

Per uur dag

Bijna 100%

± minder dan 50%

Z/W nacht

S. aureus produceert in zeer zeldzame gevallen geen coagulase - tijdens primaire kweken van een patiënt die een massale antibioticatherapie krijgt. Daarom kweken we het gewricht opnieuw op en voegen dan opnieuw plasma toe. Zo niet, dan is het geen S. aureus.

Pigment op media met een hoog eiwitgehalte en licht (WSA, wei-eiwitmedia)

Onder de coagulase-negatieve stafylokokken kunnen sommige ook pigment vormen. S promagenes – vormt op elk medium een ​​geel pigment

Acetoïne=acetylmethylcarbinol – VP (Voges-Proskauer) reactie

Zijn medium met glucose is halfvloeibaar. Bij zaaien uit een zouthoudende omgeving zijn ze altijd glucose-positief, tenminste in het bovenste deel van de kolom.

Het uiteindelijke negatieve antwoord op het halfvloeibare His-medium met glucose wordt pas op de vijfde dag gegeven.

Als er gas aanwezig is, gaan we ervan uit dat het een gemengde of helemaal geen stafylokokken betreft.

Halfvloeibaar medium met mannitol werd in 1974 uitgesloten - het uiteindelijke negatieve antwoord was pas op de vijfde dag. Alleen op de beker geplaatst - het antwoord is de volgende ochtend.

Vast medium met glycerine (1%) (kan worden vervangen door suiker en alcohol). Vloeibare en halfvloeibare media worden nooit gebruikt voor differentiatie binnen de geslachten Staphylococcus en Micrococcus. Indicator – broomthymolblauw, pH – neutraal; of broomcresolrood, broomthymolrood. We zaaien in plaques - tot 10 gewassen per kopje. Radiale strip - tot 6 oogsten per kopje. Er is vergeling rond de stafylokokken. Microkokken gebruiken geen glycerine.


S. aurecularis is in testsystemen voor 95-99% vergelijkbaar met S. aureus en kan alleen worden onderscheiden door de plasmacoagulatiereactie.

Coagulase-negatieve stafylokokken

Onder bepaalde omstandigheden kunnen ze pigment produceren.

Bij stafylokokken kan differentiatie naar soorten niet worden uitgevoerd op basis van 1-2 tests.

Er zijn slechts 6-7 soorten die in plasma groeien in de vorm van Mannitol+-vlokken.

coagulase

Alkalische fosfatase

trehalose

Meer dan 20% van de soorten

5-10% stammen

95-100% stammen

5% stammen

S. saprophyticus

5% stammen

100% van S. aureus heeft hemolytische activiteit.

S. saprophiticus is zeer zeldzaam. Cystitis en urethritis bij vrouwen jong– gevoelig voor antibiotica en chemotherapiemedicijnen

Coagulase-negatieven kunnen niet coagulase-positief worden.

S. epidermidis is nooit coagulase-positief, ongeacht wat er in volgorde 720 staat

Een cel zonder sporen kan 10-12 dagen leven.

Alkalische fosfatase is alleen kenmerkend voor S. epidermidis.

Alkalische fosfatase - paranitrofenolfosfaat of fenolftaleïnefosfaat uit tests voor ALP in de biochemie - 50 mg per 100 ml agar, tot 20 stammen per plaat.

Paranitrofenolfosfaat → paranitrofenol (geel) en de kleur van het medium is citroengeel.

Fenolftaleïnefosfaat → fenolftaleïne (kleurloos). We alkaliseren met een ammoniakoplossing van 3-10% (laat het op het deksel van de beker vallen). De kolonies zijn karmozijnrood.

U kunt een 10% fenolftaleïnefosfaatoplossing kopen. In de koelkast jarenlang houdbaar. 0,5 ml oplossing per 100 ml agar.

S. epidermidis is van nature gevoelig voor novobiocine.

Lecitovitelase (dooierfactor) – in internationale classificatie Niet gebruikt, alleen bij ons.

20-25% van de S. epidermidis is lecithinase-positief.

80% van de S. aureus – van menselijke oorsprong – produceert lecitovitelase. Lecithine-negatieve S. aureus – van dieren.

Andere stafylokokken kunnen ook geven. Dat wil zeggen, als lecitovitelase+, dan is het 80% S. aureus, 20% andere stafylokokken.

LSA-cups voor transmissie - clearingzone (protease) - het is voor ons niet belangrijk.

Troebelheid - lipasen overheersen - is eveneens niet belangrijk.

Bourgeois-bloedmedia worden gemaakt van schapenerytrocyten. Men dacht dat menselijke stammen van S. aureus alleen α-hemotoxine produceerden, maar nu bestaat er ook een β-hemotoxine. Dit kan alleen worden bepaald aan de rode bloedcellen van schapen.

β-hemotoxine geeft na een dag een zone van onvolledige hemolyse, en als je het vervolgens tot het einde van de werkdag in de koelkast legt, zal de zone volledig opruimen.

S. aureus produceert 2 enzymen

1) thermolabiel DNase (nuclease) - alle stafylokokken en de meeste andere microben hebben het.

2) Thermostabiel DNase (nuclease) - alleen aangetroffen in S. aureus. Het wordt niet vernietigd door koken of zelfs kortstondig autoclaveren.

En volgens onze orders wordt alleen thermolabiel DNase gedetecteerd (geen punt).

In verwarmd voedsel (terwijl het feit van PTI wordt verborgen) wordt stafylokokken vernietigd, maar er blijven gifstoffen achter. De aanwezigheid van thermostabiel DNase kan bepalen of S. aureus aanwezig was.

Volgens orders is sterk gepolymeriseerd DNA 1-2 mg per 1 ml medium (pH = 8,0). Een bord zaaien met plaques (of een injectie). 24 uur. We ontwikkelen het door de beker te vullen met 3N HCl, er ontstaat een DNA-neerslag met HCl, en waar de DNase heeft gewerkt, zien we een clearingzone. Bij S. aureus is de straal 10-12 mm, bij S. epidermidis is de straal 4-5 mm. Rondom het gat met de gedode S. aureus cultuur – 7-8 mm.

S. epidermidis produceert alleen hitte-labiel DNase, S. aureus produceert beide DNases – de zone is groter.

Inhoudsopgave van het onderwerp "Gram-positieve kokken. Stafylokokken.":









Microbiologische diagnose van Staphylococcus aureus. Microscopie van Staphylococcus aureus. Isolatie van Staphylococcus aureus. Coagulase-test.

Microscopie van Staphylococcus aureus. Detectie van ophopingen van grampositieve kokken en polymorfonucleaire leukocyten tijdens het onderzoek van gekleurde uitstrijkjes van klinisch materiaal kan als basis dienen voor een voorlopige diagnose. Er moet aan worden herinnerd dat de resultaten van microscopie niet als voldoende kunnen worden beschouwd om tot een eindconclusie te komen.

Isolatie van Staphylococcus aureus

Cultuur van Staphylococcus aureus uitgevoerd op eenvoudige voedingsmedia, meestal thioglycolmedium en CA. Als er een risico bestaat op monstercontaminatie, worden differentiële diagnostische media gebruikt. De meest gebruikte zijn melk-zout (of melk-geel-zout) agar en zout-agar met mannitol; de groei van verontreinigende microflora wordt geremd door een hoge concentratie NaCl. Bovendien demonstreert melkzoutagar (MSA) het vermogen om pigment te vormen en lecithine af te breken (lecitotelase-activiteit). IN De laatste tijd Agar met colistine en nalidixinezuur wordt op grote schaal gebruikt als differentieel diagnostisch medium.

Na 18-24 uur Staphylococcus aureus (S. aureus) vormt gladde convexe troebele kolonies met een diameter van ongeveer 4 mm. De bacteriën synthetiseren een geel pigment; de kleur van de kolonies varieert van wit tot oranje. Op de CA worden de kolonies van S. aureus omgeven door een zone van volledige hemolyse (Fig. 1, zie kleurinzet).

Stafylokokken goed groeien in de bouillon, waardoor deze eerst uniform troebel wordt en vervolgens een los, schilferig sediment vormt. Ze geven een zeer karakteristieke groei van gelatine; na 24-28 uur (samen met overvloedige groei langs de prik van de microbiologische naald) wordt een initiële vloeibaarmaking van het medium waargenomen en op de 4-5e dag wordt een naar beneden open trechter gevormd, gevuld met een vloeibaar gemaakt medium.

Voor intraspecifieke differentiatie Staphylococcus aureus (S. aureus) wordt een coagulasetest gebruikt (op de aanwezigheid van een stollingsfactor), die bij 95% van de isolaten positief is (Fig. 12-3). Er zijn nog meer onderscheidende kenmerken.

Mogelijkheid om mannitol te fermenteren onder anaërobe omstandigheden.
De activiteit van lecitotelase is de vorming van een parelachtig “kroon”-precipitaat dat de kolonies omringt die op medium zijn gegroeid met toevoeging van eigeel. Het neerslag bestaat uit fosforylcholine, gevormd uit eigeellecithine onder invloed van een enzym.
Mogelijkheid om thermostabiel DNase te synthetiseren.
Het vermogen om gesensibiliseerde rode bloedcellen van schapen te agglutineren (de laatste test detecteert proteïne A, stollingsfactor of beide producten).

Voor uitdrukkelijke identificatie Staphylococcus aureus (S. aureus) gebruik een latexagglutinatietest met behulp van commerciële kits met AT-geladen latexdeeltjes, zoals Staphylatex (American Microscan).